1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
23 | 11 | 69,0±6,9 | 39,3±0,6* | 57,3±5,9+ |
24 | 11 | 64,0±13,1 | 22,2±2,9* | 29,7±3,9+ |
Содержание ЛКБ в нейтрофилах в у. е. | ||||
19 | 6 | 1,7±0,1 | 1,3±0,1* | 80,2±8,4+ |
20 | 6 | 1,2±0,1 | 1,1±0,1 | 91,7±4,6+ |
21 | 6 | 1,9±0,3 | 1,9±0,3 | 99,0±1,3 |
22 | 11 | 2,3±0,3 | 2,2±0,1 | 98,6±10,9 |
23 | 11 | 1,8±0,1 | 1,6±0,4 | 99,1±0,8 |
24 | 11 | 2,7±0,2 | 2,4±0,2* | 93,6±4,9+ |
Количество диформазан-положительных нейтрофилов в % | ||||
19 | 7 | 4,5±0,6 | 27,8±4,8* | 639,0±30,8+ |
20 | 7 | 4,8±0,4 | 21,3±1,9* | 426,7±39,3+ |
21 | 7 | 4,5±0,5 | 16,5±3,8* | 362,5±41,1+ |
22 | 11 | 6,5±2,2 | 60,0±10,6* | 785,8±96,9+ |
23 | 11 | 13,5±4,3 | 30,0±4,4* | 300,0±53,5+ |
24 | 11 | 19,5±7,5 | 70,5±3,3* | 410,5±70,5+ |
Примечания. * - различие со значением до замораживания p<0,05; + - различие с исходным 100% уровнем p<0,05.
Изучение популяции лейкоцитов до замораживания и после отогрева указывает на эффективное хладоограждающее действие раствора №20, при его использовании абсолютное и относительное число гранулоцитов после отогрева соответствуют значениям до замораживания. В остальных случаях снижение числа гранулоцитов сопровождалось увеличением количества лимфоцитов и/или моноцитов.
Фагоцитарная активность нейтрофилов только в опытах с раствором №20 сохраняется у 75,5±8,5 % (от исходного уровня) отогретых клеток (рис. 3.4.2.1), в остальных случаях лишь 50% (а при использовании раствора №24 - 30%) нейтрофилов после отогрева были способны фагоцитировать частицы латекса.
При подсчете клеток с диформазаном в НСТ-тесте выявлено (рис. 3.4.2.2), что при использовании хладоограждающих растворов №19-24 количество диформазан положительных клеток после отогрева увеличивается (р<0,05) и в разной степени по сравнению с данными нативных клеток. В опытах с растворами №19 и №22 указанное повышение было значительно выражено: количество НСТ-положительных клеток увеличилось соответственно в 6 и 8 раз.
Определение цитохимического коэффициента в ЛКБ-тесте нейтрофилов показало, что абсолютное и относительное количество гранул с катионными белками снижалось (р<0,05) только в опытах с растворами №19 и №24.
Установлено, что содержание растворенного в среде кислорода через 1 сутки холодового воздействия достоверно не изменяется по сравнению с исходным (до замораживания) уровнем, если клетки находятся в хладоограждающем растворе №20 (рис. 3.4.2.3) и статистически значимо (р<0,05) снижается при использовании раствора №23 (рис. 3.4.2.4).
Рисунок 3.4.2.3. Содержание растворенного кислорода в лейкоцитных концентратах (ЛК; n=7) в смеси с криопротекторным раствором (КР) №20 до и после хранения при –80°С в течение 1 суток
Количество Т - и В-лимфоцитов (М±σ, n=5), хранившихся при –80°С в течение 1 суток под защитой хладоограждающего раствора №20 не изменялось. Так, уровень Т-лимфоцитов до замораживания составлял 80,0±14,1%, после отогрева 83,7±8,1%, В-лимфоцитов соответственно 8,5±2,1% и 10,7±1,0%. Следовательно, при используемой криотехнологии обе популяции лимфоцитов проявляют устойчивость к холодовым факторам.
Таким образом, оценивая функциональное и морфологическое состояние лейкоцитов по примененным методикам, оптимальные результаты сохранности клеток из всех испытуемых хладоограждающих растворов после размораживания через 1 сутки были получены с растворов №20, содержащим в исходной концентрации криопротектор ГМБТОЭМ - 22 %, ДМСО - 8%, ОМЭПС - 0,4 % и бидистиллированную воду до 100 мл.
Рисунок 3.4.2.4 Содержание растворенного кислорода в лейкоцитных концентратах (ЛК; n=5) в смеси с криопротекторным раствором (КР) №23 до и после хранения при –80°С в течение 1 суток
3.4.3 Структурно-функциональная сохранность лейкоцитов, перенесших воздействие низкой температуры (–80ºС) разной продолжительности в криоконсервирующем растворе №20
Под защитой хладоограждающего раствора №20 были проведены экспериментальные исследования по изучению длительности хранения лейкоцитов в условиях низкой температуры (–80°С). Для этого были изучены функциональные (рис. 3.4.3.1) и морфологические (рис. 3.4.3.2) показатели клеток через 1 сутки и 180 суток (срок наблюдения).
Установлено (табл. 3.4.3.1), что через 180 суток экспозиции лейкоцитов при –80°С в растворе №20 снижается (р<0,05) количество гранулоцитов (по сравнению с уровнем таковых через 1 сутки хранения) и повышается число нейтрофилов с темно-синими гранулами восстановленного формазана. По остальным показателям сохранности клеток достоверных отличий в зависимости от сроков хранения не выявлено.
Таблица 3.4.3.1 Показатели лейкоцитов (М±σ), перенесших воздействие низкой температуры (–80°С) в хладоограждающем растворе №20 в течение 1 и 180 суток
Сроки хранения, сутки | n | Показатели | ||
до замораживания | после отогрева | после отогрева в % от уровня до замораживания | ||
Количество лейкоцитов в 1 мкл | ||||
1 | 10 | 15470±3967 | 14940±3636 | 95,9±3,9 |
180 | 12 | 16290±3189 | 15020±3987 | 89,3±6,4 |
Количество эозинорезистентных лейкоцитов в % | ||||
1 | 10 | 97,8±0,9 | 88,7±7,0* | 90,9±7,1 |
180 | 12 | 98,1±1,6 | 89,3±5,0* | 91,0±5,1 |
Количество гранулоцитов в % | ||||
1 | 10 | 14,0±2,3 | 13,3±2,7 | 94,5±6,9 |
180 | 12 | 36,7±8,0 | 33,6±6,0 | 85,3±7,2+ |
Количество фагоцитарноактивных нейтрофилов в % | ||||
1 | 10 | 57,4±6,2 | 43,0±1,7* | 78,1±5,9 |
180 | 12 | 65,3±1,7 | 41,8±4,0* | 76,7±14,7 |
Количество диформазан-положительных нейтрофилов в % | ||||
1 | 9 | 4,5±0,7 | 21,2±2,3* | 436,1±43,6 |
180 | 7 | 3,4±0,5 | 24,7±7,0* | 652,5±75,4+ |
Содержание ЛКБ в нейтрофилах в у. е | ||||
1 | 10 | 2,6±0,2 | 2,4±0,5 | 92,6±4,7 |
180 | 12 | 2,3±0,2 | 2,2±0,1* | 93,8±9,4 |
Примечания. * - различие со значением до замораживания p<0,05; + - различие с показателем через 1 сутки p<0,05.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 |
