Экспозиция лейкоцитов крови человека в хладоограждающем растворе №6 при температуре переохлаждения –10°С показала (табл. 3.1.3.3), что уже через 2 суток хранения по сравнению с исходным уровнем уменьшалось (р<0,05) общее количество клеток, количество эозинорезистентных лейкоцитов и число нейтрофилов, способных к фагоцитозу. При этом количество нейтрофилов, содержащих катионные белки не изменялось, а число диформазан-положительных клеток увеличивалось.
Таблица 3.1.3.3 Показатели лейкоцитов (М±σ; n=10), перенесших воздействие температуры переохлаждения (–10°С) в хладоограждающем растворе №6 в течение 3 суток
Сроки хранения, сутки | Показатели | ||
до замораживания | после отогрева | после отогрева в % от уровня до замораживания | |
Количество лейкоцитов в 1 мкл | |||
2 | 16260±243 | 14100±363* | 86,1±0,9+ |
3 | 16500±230 | 13200±208* | 79,5±16,1+ |
Количество эозинорезистентных лейкоцитов в % | |||
2 | 98,4±1,4 | 72,3±12,9* | 73,0±12,8+ |
3 | 97,8±2,3 | 55,8±10,8* | 57,2±11,5+ |
Количество гранулоцитов в % | |||
2 | 21,2±1,3 | 14,2±4,0* | 67,8±15,8+ |
3 | 24,3±2,7 | 15,2±3,7* | 61,5±12,9+ |
Количество фагоцитарноактивных нейтрофилов в % | |||
2 | 77,8±14,8 | 54,0±1,7* | 70,1±9,5+ |
3 | 85,2±13,6 | 58,9±17,6* | 69,7±4,9+ |
Содержание ЛКБ в нейтрофилах в у. е. | |||
2 | 2,8±0,2 | 2,8±0,1 | 99,2±8,1 |
3 | 2,8±0,2 | 2,8±0,1 | 101,5±3,0 |
Количество диформазан-положительных нейтрофилов в % | |||
2 | 5,3±0,5 | 6,0±0,8 | 113,4±9,3 |
3 | 4,7±0,7 | 5,7±1,1 | 119,1±13,8+ |
Примечания. * - различие со значением до охлаждения p<0,05; + - различие с исходным 100% уровнем p<0,05.
| Рисунок 3.1.3.1 Лейкоциты после 7 суток экспозиции при –10°С в хладоограждающем растворе №2 |
|
|
| Рисунок 3.1.3.2 Сегментоядерный нейтрофил, с поглощенными частицами латекса после 7 суток экспозиции при –10°С в хладоограждающем растворе №2 |
|
|
| Рисунок 3.1.3.3 Эозинположительные (красные) и эозинотрицательные лейкоциты после 5 суток экспозиции при –10°С в хладоограждающем растворе №4 |
|
|
| Рисунок 3.1.3.4 Сегментоядерный нейтрофил после 5 суток экспозиции при –10°С в хладоограждающем растворе №4 с активными гранулами, содержащими катионные белки |
Исследование криоустойчивости популяции Т - и В-лимфоцитов в хладоограждающих растворах №2 и №4 с помощью моноклональных антител в непрямом иммунофлуоресцентном тесте было невозможным, в связи с желатинизацией тестовых проб при их инкубации в термостате согласно методики постановки 15 мин при +37оС.
Таким образом, количество нейтрофилов, способных к фагоцитозу после воздействия отрицательной температуры –10°С в хладоограждающем растворе №2 сохраняются на исходном уровне 7 суток, при использовании раствора №4 - 5 суток, а раствора №6 - 1 сутки. Следует отметить, что данный показатель остается на уровне выше 70% (от исходного) в опытах с раствором №суток, раствора №4 - 9 суток, а раствора №6 - 2 суток.
3.1.4 Определение интенсивности процесса перекисного окисления липидов и антиоксидантной активности методом индуцированной хемилюминесценции в лейкоцитных концентратах, перенесших воздействие температуры переохлаждения (–10ºС) в криоконсервирующих растворах №2 и №4 разной продолжительности
При изучении влияния ингредиентов хладоограждающих растворов №2 и №4 на уровень ПОЛ-АОА лейкоцитов установлено (табл. 3.1.4.1), что криопротектор проникающего действия глицерин (7%) достоверно повышает уровень ПОЛ и АОА лейкоцитов.
При его введении в лейкоцитный концентр на хемилюминограмме отмечается повышение значения максимальной интенсивности быстрой вспышки (Imax), отражающей потенциальную способность биологического объекта к свободно радикальному окислению и значение светосуммы (S) за 30 сек, свидетельствующей о содержание радикалов. Достоверное повышение показателя tg(-2α) и снижение показателей а, Z свидетельствуют об увеличении антиоксидантного потенциала клеток в среде с глицерином.
Таблица 3.1.4.1 Влияние ингредиентов хладоограждающих растворов №2, №4 и №6 на уровень ПОЛ и антиоксидантный потенциал ядросодержащих клеток крови (n=6, М±σ)
Исследуемый субстрат | Показатели хемилюминограммы | ||||
Imax | S | tg(-2α) | a | Z | |
ЛК | 115,0±26,6 | 843,8±142,9 | 26,2±5,5 | 0,25±0,02 | 7,5±0,5 |
ЛК + глицерин 7% | 188,8±66,4 * | 1048,0±162,1 * | 49,2±16,6 * | 0,19±0,03 * | 5,8±0,9 * |
ЛК + ОМЭПС 0,3% | 121,0±7,8 | 1012,2±140,7 * | 18,6±3,5 * | 0,27±0,03 | 8,1±0,9 |
ЛК + желатин (16 000) 7,5% | 606,2±67,4 * | 3422,0±350,8 * | 133,5±17,8 * | 0,19±0,01 * | 5,6±0,2 * |
ЛК + Желатин (20 000) 7,5% | 215,0±14,5 * | 1680,0±164,2 * | 38,5±2,0 * | 0,26±0,01 | 7,8±0,4 |
ЛК + лемнан (400 000) 0,3% | 116,0±25,4 | 833,6±132,7 | 25,6±4,2 | 0,26±0,02 | 7,4±0,4 |
Примечания. ЛК – лейкоцитный концентрат; * - различие с величиной показателя лейкоцитных концентратов p<0,05.
При смешивании лейкоцитов с криопротекторами непроникающего действия желатином (7,5%) наблюдается рост уровня ПОЛ и АОА. Особенно это выражено при использовании желатина со средней молекулярной массой 16 000. При смешивании с лемнаном уровень ПОЛ и АОА не изменяются.
ОМЭПС (0,3%) вызывает повышение уровня ПОЛ лейкоцитов и снижает их антиоксидантный потенциал по показателю tg(-2α).
Однако, при совместном воздействии всех компонентов растворов на клетки, т. е. при смешивании лейкоцитов с криоконсервирующим раствором №2 или №4 уровни ПОЛ и АОА соответственно достоверно повышаются (табл. 3.1.4.2) и снижаются (табл. 3.1.4.3).
Таблица 3.1.4.2 Показатели хемилюминограммы лейкоцитов (n=6, М±σ), перенесших воздействие температуры переохлаждения (–10°С) под защитой криоконсервирующего раствора №2 в течение 7 и 12 суток
Лейкоцитный концентрат | Показатели | ||||
Imax | S | tg(-2α) | a | Z | |
до замораживания | 73,0±12,7 * | 543,0±106,2 * | 17,0±2,3 * | 0,25±0,004 * | 7,4±0,1 * |
до замораживания с раствором №2 | 261,5±7,5 | 1601,0±3,5 | 58,0±3,1 | 0,21±0,01 | 6,2±0,5 |
через 7 суток хранения | 289,2±21,4 * | 1841,0±48,4 * | 55,6±6,4 | 0,22±0,01 | 6,5±0,4 |
через 12 суток хранения | 270,5±17,2 | 1649,2±8,6 | 57,0±5,1 | 0,22±0,01 | 6,6±0,5 |
Примечание. * - различие с величиной показателя до замораживания с хладоограждающим раствором p<0,05.
Таблица 3.1.4.3 Показатели хемилюминограммы лейкоцитов (n=7, М±σ), перенесших воздействие температуры переохлаждения (–10°С) под защитой криоконсервирующего раствора №4 в течение 5 суток
Лейкоцитный концентрат | Показатели | ||||
Imax | S | tg(-2α) | a | Z | |
до замораживания | 90,5±5,2 * | 662,0±38,1 * | 21,0±0,1 * | 0,24±0,001 * | 7,3±0,01 * |
до замораживания с раствором №4 | 56,0±6,9 | 533,0±1,7 | 11,2±0,05 | 0,32±0,04 | 9,6±1,2 |
через 5 суток хранения | 86,2±20,4 * | 690,0±144,6 * | 15,2±3,9 * | 0,27±0,01 * | 8,0±0,3 * |
Примечание. * - различие с величиной показателя до замораживания с хладоограждающим раствором p<0,05.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 |
