У клеток отогретых через 7 суток хранения при –10°С с хладоограждающим раствором №2 (табл. 3.1.4.2) антиоксидантный потенциал не изменяется, а уровень ПОЛ увеличивается; через 12 суток хранения уровень ПОЛ и АОА у отогретых клеток соответствует исходным данным.
У клеток отогретых через 5 суток хранения при –10°С с хладоограждающим раствором №4 (табл. 3.1.4.3) уровень ПОЛ и антиоксидантный потенциал клеток достоверно повышаются. Указанная особенность наблюдается и через 9 суток экспозиции при –10°С (табл. 3.1.4.4).
Таблица 3.1.4.4 Показатели хемилюминограммы лейкоцитов (n=8, М±σ), перенесших воздействие температуры переохлаждения (–10°С) под защитой криоконсервирующего раствора №4 в течение 9 суток
Лейкоцитный концентрат | Показатели | ||||
Imax | S | tg(-2α) | a | Z | |
до замораживания | 118,2±10,8 * | 773,2±14,02 * | 28,9±3,9 * | 0,22±0,02 * | 6,6±0,5 * |
до замораживания с раствором №4 | 95,4±2,2 | 639,8±7,12 | 16,2±0,1 | 0,29±0,004 | 8,8±0,1 |
через 9 суток хранения | 111,8±12,5 * | 759,8±71,8 * | 24,1±3,7 * | 0,23±0,02 * | 6,8±0,5 * |
Примечание. * - различие с величиной показателя до замораживания с хладоограждающим раствором p<0,05.
3.2 Структурно-функциональные показатели лейкоцитов, перенесших воздействие субумеренно-низкой температуры (–20ºС)
3.2.1 Сохранность лейкоцитов, перенесших воздействие субумеренно-низкой температуры (–20°С) без применения криозащитного раствора
При замораживании лейкоцитов по нелинейной программе без применения хладоограждающих сред общее количество клеток в первые минуты после отогрева по сравнению с исходным уровнем (до замораживания) составляет (М±σ; n=10) 90,5±0,6% и продолжает снижаться с увеличением времени экспозиции отогретых клеток при комнатной температуре.
Оценка жизнеспособности лейкоцитов с помощью метода суправитального окрашивания эозином (рис. 3.2.1.1) выявила, что количество клеток с неповрежденной мембраной после отогрева в первые три минуты составляет 28,2±4,8%, через 5 минут снижается до 12,4±3,9%.
Анализ морфологического состава лейкоцитов показал, что сохранность гранулоцитов после отогрева в первые минуты составляет 5,1±0,2%. Другие показатели сохранности клеток определить не удалось.
3.2.2 Структурно-функциональная сохранность лейкоцитов, перенесших воздействие субумеренно-низкой температуры (–20°С) в течение 1 суток в криоконсервирующих растворах №8-11
При изучении функционального состояния лейкоцитов крови человека, подвергнутых воздействию отрицательной температуры –20°С в течение 1 суток в хладоограждающих растворах №8-11 (табл. 2.2.1) установлено (табл. 3.2.2.1), что абсолютное и относительное число клеток снижается (р<0,05) только в опытах с раствором №11. Количество клеток с неповрежденной мембраной после отогрева снижается при использовании всех вариантов хладоограждающих растворов, однако в меньшей степени это характерно для раствора №9, под защитой которого сохраняется 86,9±1,4% (от исходного уровня) эозинорезистентных клеток.
Таблица 3.2.2.1 Показатели лейкоцитов (М±σ), перенесших воздействие субумеренно-низкой температуры (–20°С) в течение 1 суток в предложенных хладоограждающих растворах
Номер раст- вора | n | Показатели | ||
до замораживания | после отогрева | после отогрева в % от уровня до замораживания | ||
Количество лейкоцитов в 1 мкл | ||||
8 | 5 | 9520±2987 | 8730±1649 | 92,4±1,5 |
9 | 7 | 8500±2686 | 7860±3007 | 91,0±6,2 |
10 | 6 | 10530±1926 | 9933±2085 | 94,3±4,6 |
11 | 12 | 17390±1304 | 15180±2516* | 88,9±10,5+ |
Количество эозинорезистентных лейкоцитов в % | ||||
8 | 5 | 99,0±0,8 | 72,8±5,7* | 73,5±4,7+ |
9 | 7 | 98,4±1,4 | 84,8±0,7* | 86,9±1,4+ |
10 | 6 | 98,8±0,7 | 78,2±7,5* | 78,1±8,1+ |
11 | 13 | 97,9±1,9 | 76,5±6,8* | 78,0±6,7+ |
Количество гранулоцитов в % | ||||
8 | 5 | 28,2±5,4 | 18,8±8,2* | 62,3±8,1+ |
9 | 7 | 34,2±6,9 | 30,4±7,3 | 80,8±12,3+ |
10 | 6 | 38,3±1,3 | 25,3±9,3* | 65,7±4,0+ |
11 | 11 | 48,8±11,1 | 20,0±6,9* | 52,2±11,9+ |
Количество фагоцитарноактивных нейтрофилов в % | ||||
8 | 5 | 66,6±6,3 | 42,4±4,3* | 63,8±6,4+ |
9 | 7 | 68,4±7,2 | 51,2±10,5* | 75,7±7,9+ |
10 | 6 | 61,8±5,4 | 36,0±3,8* | 57,6±6,5+ |
11 | 6 | 55,7±8,8 | 41,5±3,3* | 76,0±12,9+ |
Содержание ЛКБ в нейтрофилах в у. е. | ||||
9 | 5 | 2,4±0,4 | 1,9±0,6 | 80,3±1,4+ |
11 | 5 | 2,2±0,3 | 1,7±0,5 | 74,6±9,7+ |
Примечания. * - различие со значением до замораживания p<0,05; + - различие с исходным 100% уровнем p<0,05.
Оценка популяции лейкоцитов до замораживания и после отогрева указывает на лучший криозащитный эффект также хладоограждающего раствора №9, при его использовании абсолютное число гранулоцитов достоверно не изменилось после отогрева. В остальных случаях снижение числа гранулоцитов сопровождалось увеличением количества лимфоцитов и/или моноцитов.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 |
