Комбинированные криоконсерванты в сохранении функций лейкоцитов (стр. 15 )

Выявление соединений, обеспечивающих микробицидность нейтрофилов без участия кислорода с помощью лизосомально-катионного теста показало (М±σ, n=5), что уровень среднего цитохимического коэффициента у нейтрофилов, замороженных до –40°С под защитой хладоограждающего раствора №13 снижается (p<0,05) 81,7±12,4% от исходного 100% уровня.

Установлено, что под защитой хладоограждающего раствора №13 после размораживания через 1 сутки отмечается тенденция к увеличению численности популяции Т-лимфоцитов (88,3±2,1%; М±σ, n=5) в сравнении с уровнем до замораживания (82,8±1,9%), однако количество В-лимфоцитов статистически значимо (p<0,05) снижается: исходно - 9,2±3,9% (М±σ, n=5), после отогрева 2,7±0,6%, следовательно, эта популяция лимфоцитов при данных условиях обладает низкой устойчивостью.

Также установлено (рис. 3.3.2.2), что содержание растворенного в среде кислорода через 1 сутки холодового воздействия не изменяется по сравнению с исходным (до замораживания) уровнем, если клетки находятся в хладоограждающем растворе №13.

Рисунок 3.3.2.2 Содержание растворенного кислорода в лейкоцитных концентратах (ЛК; n=5) и в их смеси с криопротекторным раствором (КР) №13 до и после хранения при –40°С в течение 1 суток

3.3.3 Структурно-функциональная сохранность лейкоцитов, перенесших воздействие умеренно-низкой температуры (–40ºС) разной продолжительности в криоконсервирующем растворе №13

С хладоограждающим раствором №13 были проведены экспериментальные исследования по определению длительности нахождения лейкоцитов при -400С с сохранением их функциональных и морфологических показателей. Изучены следующие сроки экспозиции - 20, 30, 40, 50 и 60 суток.

Установлено (табл. 3.3.3.1), что абсолютное и относительное число лейкоцитов крови человека замороженных (–40°С) в хладоограждающем растворе №13 снижается (р<0,05) после 30 суток хранения. Количество эозинорезистентных клеток после 40 суток экспозиции при –40°С составляет менее 70% от исходного до замораживания. Морфологический состав лейкоцитов (рис. 3.3.3.1), достоверно изменяется после 20 суток хранения за счет уменьшения числа гранулоцитов и соответствующего повышения уровня лимфоцитов при просмотре 100 клеток. Количество нейтрофилов, способных к фагоцитозу при воздействии умеренно-низкой температуры –40°С снижается (р<0,05) после 30 суток хранения.

Исследование содержания в нейтрофилах активированных кислородных метаболитов (АКМ) в НСТ-тесте показало, что у нейтрофилов, находящихся в хладоограждающем растворе №13 в течение 20 суток при –40°С наблюдается повышение содержания АКМ в 3 раза, а в течение 30 суток - в 4 раза.

Согласно данным лизосомально-катионного теста уровень среднего цитохимического коэффициента у размороженных нейтрофилов при их хранении в растворе №13 (рис. 3.3.3.2) не изменяется через 20 и 30 суток хранения, т. е содержание микробицидных белков в клетке остается на исходном уровне.

Таблица 3.3.3.1 Показатели лейкоцитов (М±σ), перенесших воздействие умеренно-низкой температуры (–40°С) в хладоограждающем растворе №13 в течение 60 суток

Примечания. * - различие со значением до замораживания p<0,05; + - различие с исходным 100% уровнем p<0,05.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27