На правах рукописи

механизмЫ анксиолитического и антидепрессантного действия тенотена

(Экспериментальное иССЛЕДОВАНИЕ)

14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Томск, 2012

Работа выполнена в Обществе с ограниченной ответственностью «Научно-производственной фирме «МАТЕРИА МЕДИКА ХОЛДИНГ» и Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

, доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, лаборатория фитофармакологии, заведующий лабораторией

, доктор биологических наук, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт психического здоровья» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, лаборатория нейробиологии, старший научный сотрудник

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита диссертации состоится «___»________________ 2012 г. в _____ часов на заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук ( г. Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Автореферат разослан «_____»_________________ 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор биологических наук

Введение

Актуальность проблемы. В настоящее время наиболее широко распространенными психическими заболеваниями являются тревожные и депрессивные расстройства [Howland, R.H., Thase, M.E., 2005; Calleo, J., Stanley, M., 2008; Sennfelt, D.A. et al., 2011]. Как депрессивные расстройства, так и тревожные состояния представляют собой чрезвычайно гетерогенную группу заболеваний (по МКБ-10 тревожные расстройства включают заболевания от F40 до F48, депрессивные – от F30 до F39) – начиная от относительно легких форм, проходящих самостоятельно, и заканчивая крайне тяжелыми, психотическими, инвалидизирующими состояниями, способными привести к смерти. Сочетание тревожных и депрессивных расстройств (по литературным данным их коморбидность составляет до 60% случаев) затрудняет диагностику и подбор правильного лечения, что снижает эффективность терапии и увеличивает частоту рецидивов по сравнению с пациентами, страдающими только тревожными или только депрессивными расстройствами [Patten, S. B. et al., 2010; Mittal, D. et al., 2011].

Современная фармакотерапия тревожных расстройств включает помимо бензодиазепиновых анкиолитиков (диазепам, феназепам, лоразепам) препараты различного механизма действия, в том числе проявляющие активность в отношении ГАМК-А - (фенибут, баклофен, мексидол), серотонин - (буспирон, кетансерин, ондасертон) эргических систем, β-адреноблокаторы (пропранолол) и т. д. Основными классами препаратов для лечения депрессии являются трициклические антидепрессанты, ингибиторы моноаминоксидазы и ингибиторы обратного захвата серотонина. Однако не существует препарата, одинаково эффективно устраняющего симптомы тревожных и депрессивных расстройств при их коморбидности. Есть данные об эффективности лишь ингибиторов обратного захвата серотонина [Kuzel, R.J., 2005]. Кроме того, поскольку коморбидные тревожные и депрессивные расстройства часто сопутствуют другим заболеваниям, особенно хроническим (таким, как диабет, эпилепсия, болезнь Паркинсона, сердечно-сосудистые заболевания и др.) [Ekinci, O., Titus, J.B., 2009; Martinez-Martin, P., Damian, J., 2010], необходимо учитывать безопасность совместного применения психотропных препаратов и препаратов для лечения основного заболевания. Таким образом, актуальной задачей психофармакологии является поиск не только эффективных препаратов для лечения тревожных расстройств или депрессии, но и препаратов, сочетающих эффективность в лечении коморбидных тревожных и депрессивных расстройств и высокую безопасность.

Одной из потенциальных мишеней фармакотерапии тревожных и депрессивных расстройств являются белки S100 [Schroeter, M. L. et al., 2010; Мартюшев-Поклад, А. В., Воронина, Т. А., 2004]. Белки S100 обладают разнообразными функциями в ЦНС, участвуют в многочисленных внутриклеточных процессах (в том числе в передаче внутриклеточного Ca2+--сигнала, регуляции роста, дифференцировки, апоптоза клеток, энергетического метаболизма нейронов и глии) [Sorci, G. et al., 2010]. Все эти функции белков S100 обуславливают их влияние на синаптическую пластичность и участие в регуляции стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем, дисбаланс которых (в первую очередь недостаточность ГАМК-ергической системы) является нейробиологической основой большинства депрессивных и тревожных патологий.

Настоящая работа посвящена экспериментальному изучению анксиолитической и антидепрессантной активности препарата тенотен, действующим веществом которого являются сверхмалые дозы антител к белку S100, и исследованию возможных механизмов действия этого препарата.

Цель исследования: Оценить анксиолитическую и антидепрессантную активность препарата тенотен в сравнении со стандартными анксиолитиками и антидепрессантами, изучить механизм действия тенотена.

Задачи исследования:

1. Оценить анксиолитический эффект тенотена в условиях различных моделей тревожных состояний, а также зависимость этого эффекта от тяжести тревоги, вводимой дозы препарата и типа эмоционально-поведенческой реакции животных на стресс.

2. Оценить антидепрессантный эффект тенотена в условиях стандартных тестов (тест вынужденного плавания по Porsolt и тест вынужденного плавания в сосуде с колесами по Nomura).

3. Оценить выраженность седативного и миорелаксантного эффектов тенотена и влияние препарата на координацию движений и память.

4. Изучить влияние тенотена на электрофизиологические процессы в головном мозге при помощи спектрально-когерентного анализа электроэнцефалограмм (ЭЭГ) различных структур мозга крыс.

5. Оценить участие различных нейромедиаторных систем в реализации эффектов тенотена in vivo с помощью фармакологического анализа.

6. Оценить участие различных нейромедиаторных систем в реализации эффектов тенотена in vitro с помощью радиолигандного анализа и измерения функциональной активности серотониновых рецепторов, σ1-рецептора и глицинового сайта NMDA рецептора.

Положения, выносимые на защиту:

1. При однократном и курсовом введении тенотен обладает анксиолитическим действием, сравнимым по выраженности с эффектами бензодиазепиновых (диазепам, медазепам) и атипичных (мексидол) анксиолитиков.

2. Анксиолитический эффект тенотена зависит от функциональных особенностей тревожных состояний и проявляет прямую корреляционную зависимость эффективной дозы от тяжести тревожного состояния.

3. Тенотен оказывает анксиолитическое действие как на животных с пассивным типом эмоционально-поведенческого реагирования на стресс, так и на животных с активным типом, причем более выраженный в относительных величинах эффект отмечается у низкоактивных животных.

4. При однократном и курсовом введении тенотен обладает антидепрессантным действием, сравнимым по выраженности с эффектом амитриптилина.

5. В эффективной терапевтической дозе тенотен не оказывает седативного влияния, не проявляет миорелаксирующего действия, не нарушает координации движений и памяти.

6. Тенотен оказывает влияние на биоэлектрическую активность мозга, характерное для бензодиазепиновых анксиолитиков, в частности, диазепама, вызывая увеличение мощности в альфа - и бета-диапазонах.

7. Анксиолитический и антидепрессантный эффекты тенотена реализуются через ГАМК-, серотонин - и глутаматергические медиаторные системы, а также сигма-рецепторы.

Научная новизна. Впервые экспериментально изучена зависимость выраженности эффекта тенотена от условий проведения теста, дозы и особенностей эмоционально-поведенческой реакции на стресс. Впервые показано отсутствие побочных эффектов (седативного, миорелаксантного и амнестического) при применении эффективной дозы препарата. Впервые выявлены электрофизиологические механизмы анксиолитического и антидепрессантного действия тенотена, показано in vitro и in vivo, что в реализацию этих видов активности препарата вовлечены ГАМК-А-, ГАМК-В-, серотонинергическая и глутаматергическая системы, а также σ1-рецепторы.

Практическое значение работы. В результате проведенной работы получены экспериментальные данные о фармакологических свойствах тенотена. Выявлено, что по выраженности анксиолитической активности тенотен сравним с бензодиазепиновыми анксиолитиками (диазепам, медазепам, клобазам) и некоторыми атипичными анксиолитиками (мексидол), причем в спектр его психотропного действия входят антидепрессантный, антиагрессивный и ноотропный эффекты и отсутствуют седативный, миорелаксантный и амнестический эффекты. Выявлены механизмы, лежащие в основе психотропной активности тенотена. Материалы экспериментальных исследований вошли в комплект документов, представленных в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения и социального развития Российской Федерации (РФ) и соответствующие службы других стран, с целью разрешения препарата к широкому медицинскому применению в РФ (Регистрационное удостоверение № ЛС-000542 от 01.01.2001).

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на V международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (Москва, 2005), Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2006, 2010), XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006), II национальном конгрессе по социальной психиатрии «Социальные преобразования и психическое здоровье» (Москва, 2006), II и IV Международных междисциплинарных конгрессах «Нейронаука для медицины и психологии» (Судак, 2006, 2008), X Мультидисциплинарной Интернациональной конференции нейронауки и биологической психиатрии «Стресс и поведение» (Санкт-Петербург, 2007), VII национальном научно-медицинском конгрессе «Здоровье человека» (Ереван, 2008), VII Международном конгрессе «Доказательная медицина – основа современного здравоохранения» (Хабаровск, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, выводов, списка литературы, содержит 20 таблиц и 11 рисунков. Библиографический указатель включает 225 источников, из них 53 отечественных и 172 иностранных.

Материалы и методы исследования

В экспериментах были использованы 840 беспородных белых крыс-самцов (200-250 г), полученных из питомника «Столбовая» Московской области, и 80 крыс-самцов линии Rj:Wistar (Han) (160-227 г), полученных из питомника Elevage Janvier (Франция). Животные содержались в условиях вивария при свободном доступе к воде и брикетированному корму при стандартном освещении и комнатной температуре.

Исследования проводили в соответствии с методическими указаниями, опубликованными в Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ [2005].

В работе исследовали спектр психотропной активности и механизм действия тенотена, который вводили внутрижелудочно с помощью зонда.

В качестве препаратов сравнения были использованы: диазепам (Polfa, Польша), медазепам (Фармахим, Болгария), мексидол ( «Фармасофт», Россия), клобазам (Sanofi-Synthélabo, Франция), амитриптилин (Spofa, Чехия), пирацетам ( УфаВИТА», Россия), которые вводили внутрижелудочно. Для фармакологического анализа использовали бикукуллин, пикротоксин, баклофен, факлофен, кетансерин, 5-ОТФ (ICN Biomedicals Inc., США), которые вводили внутрибрюшинно.

Оценка анксиолитического эффекта тенотена

Оценка анксиолитического действия тенотена проводилась в двух модификациях конфликтной ситуации [Vogel, J.R. et al., 1971], основанной на столкновении питьевой и оборонительной мотиваций. Принцип методики заключается в подавлении болевым электрическим раздражителем питьевого рефлекса у крыс при потреблении ими воды из трубки-поилки. Эффект анксиолитиков заключается в преодолении страха перед электроболевым раздражением, что выражается в увеличении числа наказуемых взятий воды, несмотря на получение при этом ударов тока.

Одна из модификаций теста была разработана в России в НИИ фармакологии РАМН имени и рекомендована в качестве стандартной методики для изучения анксиолитической активности фармакологических веществ [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, 2000, 2005]. В первый день беспородных белых крыс полностью лишали питья. После 24-часовой депривации у крыс проводили выработку навыка взятия воды из поилки, расположенной в экспериментальной камере размером 27,5 х 27,5 х 45 см, пол которой состоял из прутьев нержавеющей стали [Молодавкин, Г. М., Воронина, Т. А., 1995]. На третий день (после 48-часовой питьевой депривации) крыс снова помещали в экспериментальную камеру. Через 10 сек после первого взятия воды каждая попытка питья становилась наказуемой (на сосок поилки и электродный пол камеры подавали постоянный ток силой 0,2 мА). Тест проводили в течение 10 минут, тестируемые препараты вводили за 30 минут до тестирования.

Другая модификация метода конфликтной ситуации по Vogel была разработана и валидирована в лаборатории Porsolt&Partners Pharmacology (Франция). После 48-часовой питьевой депривации крыс линии Rj:Wistar (Han) помещали в прозрачную плексигласовую камеру размером 15 x 32 x 34 см, пол камеры состоял из прутьев из нержавеющей стали диаметром 0,4 см, расположенных на расстоянии 1 см друг от друга. Задняя стенка клетки была сделана из непрозрачного плексигласа, скрывая тем самым наблюдателя. В центре противоположной стенки, на расстоянии 5 см от пола расположили поилку, соединенную с одним полюсом шокового генератора (Apelex: тип 011346). Другой полюс генератора был соединен с металлической сеткой на полу. Крыса исследовала пространство до тех пор, пока не обнаруживала поилку с водой. Каждый раз во время питья, через 2 сек после того, как она начинала пить, крыса получала удар электрического тока (1,7 мA). Тест проводили в течение 3 минут, тестируемые препараты вводили за 60 минут до тестирования.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5