Анализ клеток происходит в проточной кювете при пересечении луча лазера длиной 633 нм (рис. 21 - не приводится). После контакта лазерного луча с окрашенной клеткой происходит рассеивание последнего под большим и малым углами и возбуждение флюоресцентного красителя. Данные сигналы улавливаются фотоумножителями и регистрируются в виде трех параметров (рис. 22 - не приводится):
1. Светорассеивание под малым углом (FSC) - отклонение лазерного луча под малым (до 10 град.) углом, которое зависит от размера (объема, только при условии сферической формы частицы) и формы клетки;
2. Боковое светорассеивание (SSC) - рассеивание под углом до 90 град. зависит от рефрактерного индекса (или плотности) клетки и характеризует сложность внутриклеточных структур;
3. Детекция специфического флюоресцентного сигнала (SFL), которая регистрируется также как боковое светорассеивание под углом 90 град. и позволяет судить о содержании РНК/ДНК в клетках.
На основании полученных сигналов все клетки распределяются по соответствующим кластерам (зонам) в соответствии с их размером, структурой и количеством ДНК (рис. 23 - не приводится). Таким образом, происходит дифференцировка лейкоцитов на 4 популяции: лимфоциты, моноциты, эозинофилы и нейтрофилы вместе с базофилами (рис. 24 - не приводится).
Разделение нейтрофилов и базофилов происходит в базоканале, где используется метод специфического химического лизиса, основанный на предварительной обработке лейкоцитов реактивом, осуществляющим лизис всех клеток, за исключением базофилов (рис. 25 - не приводится), с последующим дискриминантным анализом всех элементов по размеру и сложности структуры и количеству ДНК (рис. 26 - не приводится).
Кроме того, приборы оборудованы каналом для выделения незрелых гранулоцитов и атипичных лимфоцитов.
Таким образом, использование приборов с полным дифференцированным подсчетом лейкоцитов (5Diff) позволяет повысить точность дифференциального подсчета лейкоцитов, провести скрининг нормы и патологии, динамический контроль за лейкоцитарной формулой и резко сократить ручной подсчет лейкоцитарной формулы, оставляя примерно до 15-20% образцов крови для световой микроскопии.
Определение гемоглобина
В классическом гемиглобинцианидном методе (метод Драбкина)
+2 +3
Fe гемоглобина окисляется до Fe метгемоглобина феррицианидом,
затем метгемоглобин переводится в стабильный цианметгемоглобин
цианидом. Оптическая плотность CNmetHb измеряется при 540 нм, при
которой имеется максимум поглощения. Гемиглобинцианидный метод
рекомендован Международным комитетом по стандартизации в
гематологии Всемирной Организации Здравоохранения и используется в
мировой практике более 30 лет.
В гематологических анализаторах к методам определения гемоглобина предъявляется ряд специфических требований. Во-первых, время реакции должно быть в десятки раз меньше для обеспечения высокой производительности анализаторов. Во-вторых, для оптимизации конструкции анализаторов гемоглобин должен измеряться в том же гемолизате, который используется для подсчета лейкоцитов, и, следовательно, компоненты, обеспечивающие гемоглобиновую реакцию, не должны негативно влиять на подсчет лейкоцитов.
Многие гематологические анализаторы измеряют концентрацию
гемоглобина модифицированным гемиглобинцианидным методом. Высокая
скорость реакции достигается путем быстрого лизиса эритроцитов,
+3
денатурирования и окисления гемоглобина до Fe с помощью
поверхностно-активных веществ. Последующая реакция с цианидом
формирует устойчивую форму со спектром поглощения, похожим на
спектр гемиглобинцианида в методе Драбкина, и максимумом
поглощения около 545 нм. Достоинством метода является его
простота, высокая скорость реакции и стабильность конечного
продукта. Применение циановых методов в гематологических
автоанализаторах имеет два существенных недостатка, связанных с
тем, что цианид из флаконов постепенно выпаривается в виде
синильной кислоты. Во-первых, это может оказывать вредное
воздействие на персонал при плохой вентиляции помещения.
Во-вторых, это приводит к ухудшению реакции и изменению калибровки
по гемоглобину через 2-3 месяца после подсоединения к прибору
флакона с гемолитиком.
Учитывая недостатки модифицированных гемиглобинцианидных методов, в последние годы в большинстве новых моделей гематологических анализаторов используются бесциановые методы. Одной из первых бесциановый SLS (натрий лаурил сульфат)-метод использовала фирма Sysmex. Этот метод оказался не совместимым с определением лейкоцитов в одном канале, для его реализации используется дополнительный реагент и канал измерения.
В других современных бесциановых методах используются
компоненты гемихромной реакции, которые совместимы с подсчетом
лейкоцитов и их дифференциацией на три популяции. Высокая скорость
реакции достигается путем быстрого лизиса эритроцитов,
+3
денатурирования и окисления гемоглобина до Fe с помощью
окислителей в присутствии поверхностно-активных веществ. При этом
в качестве лигандов атомов железа гема используются отличные от
цианида вещества.
Оптимальной областью фотометрирования является максимум спектральной кривой поглощения. Для гемиглобинцианида - это 540 нм (рис. 27 - не приводится), которая и есть рабочая длина волны для этого метода. Измерение в максимуме кривой, где смягчаются требования к точности установки длины волны, снижает требования к точности изготовления и стабильности оптических фильтров. Максимум кривой поглощения гемихрома находится на длине волны 533 нм. Однако измерение на этой длине волны возможно только в спектрофотометрах. В фотометрических ячейках гематологических анализаторов, как правило, применяются полосовые светофильтры с типовыми длинами волн. Ближайшая к 533 нм типовая длина волны 540 нм, на которой и проводится фотометрирование с учетом коэффициента пересчета для 540 нм. При переходе с цианового на бесциановый метод, как правило, требуется корректировка калибровки гемоглобина в пределах 0-5%.
Качество результатов исследования крови на гематологическом анализаторе определяется следующими факторами:
- точностью дозирования цельной или разведенной крови;
- точностью дозирования изотонического раствора при проведении процедуры разведения крови;
- точностью определения объема суспензии, пропущенного через датчики подсчета клеток;
- точностью самого подсчета клеток;
- точностью определения размеров клеток;
- корректностью математических методов обработки первичных результатов измерений.
Во избежание случаев несовместимости реагентов следует использовать изотонический раствор и гемолитик от одного изготовителя. При смене реагентов одного производителя на реагенты другого производителя необходимо проверить калибровку анализатора по контрольной крови, обращая особое внимание на Hb и MCV/HCT, и при необходимости нужно делать перекалибровку этих показателей. Калибровка других показателей, как правило, не меняется.
При эксплуатации гематологических анализаторов важную роль играет качество электрической сети и заземления. Внезапное отключение электропитания приводит к сбоям в работе приборов и необходимости вмешательства инженеров сервисной службы. В том случае, если электрическое питание пропадает в момент забора пробы или анализа и появляется спустя несколько часов (5-20 ч), последствия могут оказаться значительно более серьезными - может выйти из строя гидравлика, засориться сгустками крови капиллярные трубки, апертура и т. д. Поэтому прибор должен работать с источником бесперебойного питания, который должен обеспечить возможность окончания анализа и промывку прибора, т. е. работу прибора в течение нескольких минут.
Периодически необходима калибровка по стандартным материалам, так как электронные и механические компоненты прибора, датчиков, насосов и т. д. со временем подвергаются старению и меняют свои технические параметры. Для осуществления калибровки необходимо пользоваться только качественными контрольными материалами!
Важно
Гематологические анализаторы очень чувствительны к длительным отключениям и перебоям в работе, что связано с подсыханием шлангов, проростом микрофлоры, кристаллизацией из растворов. При длительной остановке (на период отпуска, переезда или отсутствия реагентов) обязательным является заполнение шлангов консервирующими растворами с последующей многократной отмывкой от них.
Общее правило - не прерывать работу гематологического анализатора на длительный срок.
Автоматизированные гематологические анализаторы,
поставляемые в КДЛ в рамках Приоритетного национального
проекта "Здоровье"
Для оснащения клинико-диагностических лабораторий поликлиник предпочтение отдано автоматизированным гематологическим анализаторам, работа которых основана на кондуктометрическом методе, который позволяет получить до 18 параметров крови с определением трех популяций лейкоцитов (лимфоциты, клетки средних размеров, гранулоциты).
При использовании такого анализатора определяют:
Эритроцитарные параметры
- RBC (количество эритроцитов)
- HGB (концентрация гемоглобина)
- НСТ (гематокрит)
- MCV (средний объем эритроцита)
- МСН (среднее содержание гемоглобина в эритроците)
- МСНС (средняя концентрация гемоглобина в эритроците)
- RDW (ширина распределения эритроцитов по объему)
Тромбоцитарные параметры
- PLT (количество тромбоцитов)
- MPV (средний объем тромбоцита)
- РСТ (тромбокрит)
- PDW (ширина распределения тромбоцитов по объему)
Лейкоцитарные параметры
- WBC (количество лейкоцитов)
- GR (гранулоциты, % и # - относительное и абсолютное количество)
- LY (лимфоциты, % и # - относительное и абсолютное количество)
- МО (моноциты, % и # - относительное и абсолютное количество)
Гистограммы (распределение клеток по объему)
- Эритроцитарная
- Тромбоцитарная
- Лейкоцитарная.
Автоматизированный гематологический анализатор MEK-6400J/K
Прибор производства фирмы Nihon Kohden Corporation, Япония, определяет 18 параметров крови (рис. 28 - не приводится).
В приборе существует пять режимов разведения: нормальный, режим низкого, высокого и очень высокого разведения, режим предварительного разведения.
В нормальном режиме разведения измеряется образец объемом 30 мкл.
Для режимов измерения крови с предварительным разведением можно указать объем исследуемой крови (10 или 20 мкл). Этот режим удобен при работе с малым объемом крови, особенно у детей и пожилых людей.
При наличии лейкоцитоза образец крови может быть измерен в режиме высокого или более высокого разведения. В режиме высокого разведения образец крови объемом 10 мкл разводится втрое больше обычной пропорции разведения. В режиме более высокого разведения 5 мкл образца крови разводится в пропорции, в шесть раз большей обычной пропорции разведения.
В случаях низкого содержания в крови лейкоцитов и тромбоцитов образец измеряется в режиме низкого разведения, при котором 55 мкл крови разводится в пропорции, вдвое меньшей обычной пропорции. Пересчет с высоким/низким разведением недоступен для образцов в режиме предварительного разведения.
В анализаторе предусмотрено два типа автоматического пересчета клеток крови - при наличии сигналов тревоги ("флагов") и при тромбоцитопении. При этом автоматически производится двойной подсчет образца крови, выводятся и сохраняются средние значения исследуемых параметров. В случае серьезных отклонений (более 10%) между показаниями двух подсчетов автоматически выполняется третий и используется среднее значение двух самых близких по значениям подсчетов. При тромбоцитопении анализатор также автоматически производит пересчет образца, при этом пересчитываются также такие показатели, как RBC, НСТ, PLT, MCV, РСТ, МСН, МСНС и RDW. Оператор может самостоятельно установить порог, при котором происходит повторный счет клеток крови (например, 50,000/мкл, либо 100,000/мкл).
Прибор снабжен системой закодированных флагов, которые появляются на экране при наличии отклонений в измерении или изменении гистограмм распределения клеток. Следует внимательно изучить названия флагов, т. к. они помогают определить возможные причины их появления. Помимо количественных характеристик клеток крови в анализаторе отображается распределение клеток по объему в виде гистограмм, анализ которых имеет диагностическое значение.
Время исследования крови в закрытом режиме - примерно 90 сек./образец (от начала измерения до вывода данных), в открытом режиме - 60 сек.
Таблица 2
¦ Технические характеристики гематологического ¦
¦ анализатора МЕК-6400J/K ¦
+----+---++
¦ Измеренные параметры ¦ Диапазон ¦ Воспроизводимость ¦
¦ ¦ измерений ¦образца венозной крови¦
¦ ¦ ¦ (CV - коэффициент ¦
¦ ¦ ¦ вариации) ¦
+----+---++
¦WBC: количество лейкоцитов¦От 0 до 59 х ¦CV до 2,0% (для WBC в ¦
¦ ¦ 3 ¦пределах 4,0-9,0 х ¦
¦ ¦10 /мкл <*> ¦ 3 ¦
¦ ¦ ¦10 /мкл) ¦
+----+---++
¦LY%: процентное содержание¦0-99,9% ¦CV до 5,0% (для LY% ¦
¦лимфоцитов ¦ ¦в пределах 20-45%) ¦
+----+---++
¦МО%: процентное содержание¦0-99,9% ¦CV до 12,0% (для МО% ¦
¦моноцитов ¦ ¦в пределах 2-10%) ¦
+----+---++
¦GR%: процентное содержание¦0-99,9% ¦CV до 5,0% (для GR% ¦
¦гранулоцитов ¦ ¦в пределах 40-70%) ¦
+----+---++
¦LY: число лимфоцитов ¦От 0 до 59 х ¦ ¦
¦ ¦ 3 ¦ ¦
¦ ¦10 /мкл <*> ¦ ¦
+----+---++
¦МО: число моноцитов ¦От 0 до 59 х ¦ ¦
¦ ¦ 3 ¦ ¦
¦ ¦10 /мкл <*> ¦ ¦
+----+---++
¦GR: число гранулоцитов ¦От 0 до 59 х ¦ ¦
¦ ¦ 3 ¦ ¦
¦ ¦10 /мкл <*> ¦ ¦
+----+---++
¦RBC: количество ¦От 0 до 14,9 х¦CV < 1,5% ¦
¦эритроцитов ¦ 6 ¦ 6 ¦
¦ ¦10 /мкл ¦(5,0 х 10 /мкл) ¦
+----+---++
¦HGB: концентрация ¦0-29,9 г/дл ¦CV < 1,5% ¦
¦гемоглобина ¦ ¦(HGB < 16 г/дл) ¦
+----+---++
¦НСТ: гематокрит ¦0-99,9% ¦ ¦
+----+---++
¦MCV: средний объем ¦20-199 фл ¦CV < 1,0% (MCV в ¦
¦эритроцита ¦ ¦пределах 70-120 фл) ¦
+----+---++
¦МСН: среднее количество ¦10-50 пг ¦ ¦
¦гемоглобина в эритроците ¦ ¦ ¦
+----+---++
¦МСНС: средняя концентрация¦10-50 г/дл ¦ ¦
¦гемоглобина в эритроците ¦ ¦ ¦
+----+---++
¦RDW: ширина распределения ¦0-50% ¦ ¦
¦эритроцитов по объему ¦ ¦ ¦
+----+---++
¦PLT: количество ¦0-1490 х ¦CV < 4,0% ¦
¦тромбоцитов ¦ 3 ¦ 3 ¦
¦ ¦10 /мкл ¦(PLT > 3,0 x 10 /мкл) ¦
+----+---++
¦РСТ: тромбокрит ¦0-2,9% ¦ ¦
+----+---++
¦MPV: средний объем ¦0-20,0 фл ¦ ¦
¦тромбоцитов ¦ ¦ ¦
+----+---++
¦PDW: ширина распределения ¦0-50% ¦ ¦
¦тромбоцитов по объему ¦ ¦ ¦
L----+---+-
<*> В случае пересчета при критическом значении: 0-599 х
3
10 /мкл.
Гематологический анализатор MEK-6400J/K сохраняет в памяти данные подсчета 400 образцов крови и гистограммы последних 50 образцов. Результаты гематологического исследования могут быть автоматически распечатаны на принтере или переданы на персональный компьютер. В анализаторе предлагается несколько автоматических программ контроля качества, полученные данные могут быть выведены и распечатаны в виде таблиц и графиков для каждого исследуемого параметра.
Гематологический анализатор ADVIA 60
Прибор, поставляемый фирмой BAYER, - автоматический гематологический анализатор с возможностью исследований цельной крови по 18 параметрам с производительностью до 60 проб в час (рис. 29 - не приводится). Прибор позволяет проводить дифференцирование популяции лейкоцитов по трем группам в процентном и абсолютном значениях.
Малый объем цельной крови, требуемый для анализа (10 мкл), делает прибор удобным для работы с детьми, так как позволяет провести процедуру отбора крови наименее травматично и наиболее точно с использованием капилляров и микропробирок с антикоагулянтом (ЭДТА).
Реагенты упакованы в герметичные пакеты с клапанами, объединенные в единый картридж (TimePac), что препятствует взаимодействию с атмосферным воздухом, защищает реагенты от повреждений и загрязнений, сохраняет стабильность (рис. 30 - не приводится). За один цикл измерения прибор выполняет до 3 подсчетов клеток для обеспечения необходимой точности исследования пробы. Прибор обеспечивает высокую стабильность калибровки до нескольких месяцев.
Таблица 3
ТОЧНОСТЬ И ЛИНЕЙНОСТЬ ОСНОВНЫХ ИЗМЕРЯЕМЫХ ПАРАМЕТРОВ
АНАЛИЗАТОРОМ ADVIA 60
¦ Параметр Точность (CV) Диапазон линейности Перенос¦
¦ (с пределом отклонения) пробы ¦
+-------+
¦ 9 9 ¦
¦WBC < 2,5% при 10 x 10 /л От 0,5 до 80 х 10 /л: 3% < 0,5%¦
¦¦
¦RBC < 2% при 5 x 10 /л От 0,2 до 7,5 х 10 /л: 2% < 0,5%¦
¦НВ < 1,5% при 15 г/дл От 2,5 до 23 г/дл: 2% < 0,5%¦
¦НСТ < 2% при 45% От 11,6 до 55%: 3% ¦
¦ 9 9 ¦
¦PLT < 5% при 300 x 10 /л От 10 до 1,000 x 10 /л: 6% < 0,5%¦
¦Лимфоциты < 5% при 40% ¦
¦Моноциты < 10% при 10% ¦
¦Гранулоциты < 5% при 50% ¦
L
ADVIA 60 имеет возможность хранения данных калибровки, контроля качества исследований и результатов исследований крови пациентов. Распечатка результатов анализов с гистограммами и карты контроля качества производится на стандартном внешнем матричном принтере. Имеется возможность отображения флагов патологических образцов и ошибок счета, а также ввода и распечатки лабораторных норм.
Прибор ADVIA 60 долгое время присутствует на рынке лабораторного оборудования под маркой разных производителей, он зарекомендовал себя как надежный, простой в обращении и обслуживании анализатор, подходящий для разных клинико-диагностических лабораторий в качестве основного или дополнительного гематологического анализатора.
Гематологический анализатор COULTER Ас*Т
ТМ
Гематологический анализатор COULTER (R) Ас*Т diff (фирма
Beckman Coulter, Франция) - надежная, простая в эксплуатации
система, оптимальная для лабораторий с небольшим и средним объемом
исследований.
Данная модель автоматического гематологического анализатора обеспечивает исследование крови по 18 параметрам, включая дифференцировку лейкоцитарной формулы по трем основным популяциям (лимфоциты, моноциты, гранулоциты) и получение гистограмм распределения по размерам клеток для эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов.
ТМ
Рис. 31. Гематологический анализатор COULTER (R) Ас*Т diff.
Рисунок не приводится.
Применяемые технологии и методы исследования:
- Метод Культера для подсчета и определения размеров клеток;
- Трехкратный подсчет каждого образца;
- Запатентованный метод "SWEEP FLOW" (уносящего потока) для предотвращения повторного счета клеток при анализе образца;
- Непрерывный автоматический мониторинг состояния апертур;
- Продленный по времени счет тромбоцитов в случае их низкой концентрации в образце.
Простое и удобное управление анализатором, использование интернациональных символов при выборе режимов исследования позволяют работать на данной системе операторам с разным уровнем подготовки. Автоматическая очистка иглы пробоотборника, система автоматической промывки, мониторинг состояния апертур, отсутствие необходимости в ежедневном обслуживании обеспечивают повышенную надежность работы системы и уровень безопасности для оператора, гарантируют точность получаемых результатов.
Система реагентов
Для анализатора предлагается полностью готовая к использованию система реагентов компании Beckman Coulter Inc.: diff Ac*T Pak (изотонический и лизирующий раствор) и Ас*Т RINSE (раствор для промывки системы). К набору реагентов diff Ac*T Pak прилагается специальная программная карта, которая используется при инициации новой упаковки реагентов и может быть использована для хранения контрольных данных.
Для мобильных лабораторий компания Beckman Coulter предлагает специальный набор реагентов diff Ac T Tainer, который включает все необходимые компоненты - изотонический, лизирующий и промывающий раствор.
Рис. 32. Реагенты для гематологического анализатора
ТМ
COULTER (R) Ас*Т diff.
Рисунок не приводится.
Для проведения контрольных испытаний компанией предлагаются два типа контрольных реагентов - 4С Plus Cell Control и 4С ES Cell Control.
Система управления данными
- Автоматическое или ручное присвоение цифрового кода пациенту.
- Три определяемых пользователем диапазона нормальных значений для анализа разных групп пациентов.
- Хранение в памяти прибора результатов анализов до 250 образцов.
- Хранение данных контроля качества по трем уровням контрольных образцов.
- Графики Леви Дженнингса.
¦Линейность ¦
++
¦Параметры Диапазон линейности Ошибка ¦
++
¦ 3 ¦
¦WBC 0,0-99,9 x 10 клеток/мкл +/- 0,3 или ¦
¦ +/- 5,0% ¦
++
¦ 6 ¦
¦RBC 0,0-7,00 x 10 клеток/мкл +/- 0,05 или ¦
¦ +/- 5,0% ¦
++
¦Hgb 0,0-25,0 г/дл +/- 0,2 или ¦
¦ +/- 3,0% ¦
++
¦ 3 ¦
¦Plt 0,0-999 x 10 клеток/мкл +/- 10 или ¦
¦ +/- 10,0% ¦
++
¦Указанный диапазон линейности сохраняется при использовании ¦
¦стабилизированных образцов и отсутствии интерференции ¦
++
¦Точность ¦
++
¦Параметры Диапазон % CV ¦
++
¦ 3 ¦
¦WBC 6,0-15,0 х 10 клеток/мкл < 3,0 ¦
++
¦ 6 ¦
¦RBC 3,00-6,00 х 10 клеток/мкл < 3,0 ¦
++
¦Hgb 12,0-18,0 г/дл < 2,0 ¦
++
¦MCV 80,0-100,0 фл < 3,0 ¦
++
¦ 3 ¦
¦Plt 200-500 х 10 клеток/мкл < 7,0 ¦
++
¦MPV 5,0-20 фл < 3,0 ¦
++
¦RDW 12,0-15,0% < 3,0 ¦
++
¦LY 20-50% < 1,5 (S. D)¦
++
¦MO 2,0-10% < 1,5 (S. D) ¦
++
¦GR 30,0-70,0% < 3,0 (S. D) ¦
L
Представленные данные основаны на результатах 31 повтора одного образца.
Гемоглобинометр фотометрический портативный "МиниГЕМ"
Рис. 33. Гемоглобинометр фотометрический портативный
для измерения общего гемоглобина в крови гемиглобинцианидным
методом АГФ-03/540-"МиниГЕМ", торговая марка "МиниГЕМ 540".
Рисунок не приводится.
Гемоглобинометр МиниГЕМ 540 представляет собой специализированный фотометр, предназначенный для определения общего гемоглобина крови гемиглобинцианидным методом с фотометрированием на длине волны 540 нм.
Диапазон измеряемой прибором оптической плотности составляет от 0 до 0,9 Б, что соответствует концентрации общего гемоглобина крови от 0 до 360 г/л. В приборе используется стандартная пробоподготовка - 20 микролитров крови, разведение 1:250. Суммарная погрешность определения гемоглобина (с учетом погрешностей дозаторов и погрешностей биохимического метода), полученная при сравнительных медицинских испытаниях, не превышает 2% (коэффициент вариации) во всем диапазоне измеряемых концентраций. При этом собственная погрешность гемоглобинометра как фотометра - не более 1%, а воспроизводимость, оцененная по коэффициенту вариации, - не более 0,25%.
Гемоглобинометр МиниГЕМ 540 является средством измерения медицинского назначения. Он проходит первичную поверку при выпуске с завода-производителя, которую производит Ростест-Москва. Поверка прибора в эксплуатации осуществляется по инструкции, утвержденной ВНИИОФИ в феврале 2005 года.
Главной отличительной особенностью гемоглобинометра МиниГЕМ 540 является то, что он не требует периодических калибровок, сохраняет заводскую калибровку неограниченно долго, в том числе при отключении питания.
Два фактора обеспечивают это качество прибора:
1. Высокая воспроизводимость характеристик раствора гемиглобинцианида, который сохраняет свои свойства при надлежащем хранении долгие годы, в том числе коэффициента пересчета оптической плотности в концентрацию гемоглобина (или фактора калибровки).
2. Конструкция гемоглобинометра МиниГЕМ 540 обеспечивает высокую надежность фотометрических параметров прибора. МиниГЕМ 540 снабжен функцией саморегулирования, он обладает многолетней стабильностью измерений.
Другая отличительная особенность гемоглобинометра - полностью автоматизированная процедура фотометрирования.
Для определения гемоглобина достаточно опустить кювету с фотометрической пробой в прибор, и через мгновенье на дисплее отобразится значение концентрации. Пересчет оптической плотности раствора в концентрацию производится автоматически. Перед измерением прибор не нужно включать, "прогревать", подстраивать или калибровать. Гемоглобинометр автоматически выключится при вынимании кюветы до следующего измерения.
Третья особенность гемоглобинометра МиниГЕМ 540 - его портативность и низкое энергопотребление.
Корпус прибора, выполненный из светлого химически стойкого пластика, имеет размеры 178х128х43 мм. Масса прибора без батарей не превышает 300 граммов. Питание от сети через адаптер или от встроенных батарей. Ресурс батарей - 1000000 измерений или 4 года работы.
Для контроля работоспособности гемоглобинометра используется контрольная стеклянная мера, паспортизованная для каждого прибора.
Внутрилабораторный и внешний контроль качества может проводиться с помощью обычных контрольных материалов - контрольных растворов гемоглобина.
Методика измерений:
1) Подготовить пробирки, поместив в каждую из них по 5 мл трансформирующего раствора (раствор Драбкина).
2) Во время взятия крови в каждую пробирку перенести по 20 мкл капиллярной крови и тщательно перемешать раствор.
3) Через 20 минут (время лизирования) провести серию измерений. Для этого:
а) перелить в оптическую кювету реакционную смесь из очередной пробирки;
б) опустить оптическую кювету в фотометрическую ячейку прибора, при этом автоматически произойдет фотометрирование реакционной смеси, сопровождаемое звуковым сигналом, и на индикаторе появится число, соответствующее концентрации гемоглобина.
4) Записать результат измерения.
Основные параметры автоматизированного анализа
крови и факторы, влияющие на их значения
Гематологические анализаторы позволяют не только автоматизировать процесс подсчета клеток крови, повысить производительность труда в лабораториях, улучшить качество и точность измерения, но и получить дополнительные, высоко информативные характеристики клеток крови. Для правильной их интерпретации специалисты клинической лабораторной диагностики, а также врачи других специальностей должны иметь представление о нормальном кроветворении, знать клиническую симптоматику различных заболеваний и патологических процессов, возможные причины, приводящие к отклонениям в гемограмме, ориентироваться в системе расстановки флагов, имеющейся в каждом анализаторе, гистограммах и скатерограммах. При анализе гемограммы следует учитывать возможные причины ложных результатов. Только в этом случае можно профессионально прокомментировать и при необходимости помочь клиницистам в интерпретации полученных результатов исследования крови.
Любые изменения общего анализа крови трактуются как патологические и требуют тщательного обследования пациента. Изменения в гемограмме при многих заболеваниях могут иметь неспецифический характер. В этих случаях их используют для динамического наблюдения за больным, а также по ним ориентируются при прогнозировании исходов заболевания. При системных заболеваниях кроветворной системы исследование общего анализа крови приобретает первостепенное диагностическое значение. Оно определяет дальнейшую стратегию обследования пациента с последующим выбором схемы лечения и необходимо для мониторинга проводимой терапии.
В гематологических анализаторах различных фирм-производителей нормальные показатели крови могут существенно варьировать в зависимости от норм, используемых в той или иной стране. Следуя инструкции прибора, перед началом работы на анализаторе рекомендуется изменить их в соответствии с нормами, принятыми в нашей стране (таблица 3).
Таблица 3
¦ Нормальные показатели периферической крови у взрослых ¦
+---+-----+
¦ Показатель ¦ Нормальные значения ¦
¦ +--+--+
¦ ¦ мужчины ¦ женщины ¦
+---+--+--+
¦Гемоглобин, г/л ¦ 130,0-160,0 ¦ 120,0-140,0 ¦
+---+--+--+
¦ 12 ¦ ¦ ¦
¦Эритроциты (RBC) х 10 /л ¦ 4,0-5,0 ¦ 3,9-4,7 ¦
+---+--+--+
¦Гематокрит, % ¦ 40-48 ¦ 36-42 ¦
+---+--+--+
¦Средний объем эритроцита (MCV), фл, ¦80,0-100,0 ¦
¦куб. мкм ¦ ¦
+---+-----+
¦Среднее содержание гемоглобина в ¦27,0-31,0 ¦
¦эритроците (МСН), пг ¦ ¦
+---+-----+
¦Средняя концентрация гемоглобина в ¦30,0-38,0 ¦
¦эритроците (МСНС), г/дл (%) ¦ ¦
+---+-----+
¦Ширина распределения RBC по объему ¦11,5-14,5 ¦
¦(RDW - CV) (%) ¦ ¦
+---+-----+
¦Ретикулоциты, промилле (%) ¦2,0-10,0 промилле ¦
¦ ¦(0,2-1,2%) ¦
+---+-----+
¦ 9 ¦ ¦
¦Лейкоциты х 10 /л ¦4,0-9,0 ¦
+---+-----+
¦ 9 ¦ ¦
¦нейтрофилы, % (10 /л): ¦ ¦
¦ палочкоядерные ¦1,0-6,0 (0,040-0,300) ¦
¦ сегментоядерные ¦47,0-72,0 (2,000-5,500) ¦
+---+-----+
¦эозинофилы ¦0,5-5,0 (0,020-0,300) ¦
+---+-----+
¦базофилы ¦0-1,0 (0-0,065) ¦
+---+-----+
¦лимфоциты ¦19,0-37,0 (1,200-3,000) ¦
+---+-----+
¦моноциты ¦3,0-11,0 (0,090-0,600) ¦
+---+-----+
¦плазматические клетки ¦- ¦
+---+-----+
¦ 9 ¦ ¦
¦Тромбоциты (10 /л) ¦180,0-320,0 ¦
+---+-----+
¦Средний объем тромбоцита (MPV), фл ¦7,4-10,4 ¦
+---+-----+
¦Ширина распределения тромбоцитов по ¦10-20 ¦
¦объему (PDW), % ¦ ¦
+---+-----+
¦Тромбокрит (РСТ), % ¦0,15-0,40 ¦
+---+--+--+
¦СОЭ, мм/час ¦2,0-10,0 ¦2,0-15,0 ¦
L---+--+---
Эритроцитарные параметры
RBC (red blood cells) - количество эритроцитов крови
12
(х 10 /л). Определение количества эритроцитов осуществляется
путем вычитания из общего числа клеток в цельной крови тромбоцитов
и лейкоцитов. Для исключения из счета тромбоцитов, которые имеют
существенно меньшие размеры по сравнению с эритроцитами и
лейкоцитами, используются пороговые значения. Считаются все
частицы размером более 36 фл. Лейкоциты считаются в лизате после
разрушения эритроцитов. Коэффициент вариации для данного параметра
составляет 1-2%, а в некоторых приборах - менее 1%. Следует
отметить, что иногда лейкоциты включаются в подсчет вместе с
эритроцитами, так как их влияние в норме незначительно. Их
количество на 3 порядка (несколько тысяч) существенно меньше числа
эритроцитов (несколько миллионов). В случаях гиперлейкоцитоза при
таком способе ошибка измерения эритроцитов возрастает (таблица 4).
Таблица 4
¦ Возможные ошибки измерения эритроцитов ¦
+++
¦ Ложное повышение ¦ Ложное понижение ¦
+++
¦- гигантские тромбоциты ¦- агглютинация эритроцитов ¦
¦(с объемом более 30 фл) ¦- выраженный микроцитоз ¦
¦- криоглобулинемия ¦эритроцитов ¦
¦- высокий лейкоцитоз ¦- гемолизированные образцы крови¦
¦ 9 ¦ ¦
¦(более 50 х 10 /л) ¦ ¦
L+
Присутствие криоглобулинов может вызвать увеличение WBC, RBC или PLT и концентрации HGB. В таких случаях следует прогреть образец крови до 37 град. С в течение 30 минут и немедленно провести измерение. Криоглобулинемия может наблюдаться у больных миеломой, макроглобулинемией Вальденстрема, злокачественными новообразованиями, лейкозом, лимфопролиферативными и аутоиммунными заболеваниями, вирусным гепатитом, сахарным диабетом.
Агглютинация эритроцитов может привести к занижению показателей RBC, увеличению MCV. Это можно проверить по повышенным значениям МСН и МСНС
Нормобласты (NRBC) - большинство гематологических анализаторов подсчитывает все ядросодержащие клетки, поэтому при наличии нормобластов в периферической крови они определяются как лейкоциты и могут быть причиной увеличения WBC и лимфоцитов, т. к. нормобласты имеют размер малого лимфоцита. В этих случаях необходим строгий визуальный контроль и коррекция истинного количества лейкоцитов.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 |
