б) из колонии приготовить мазок;
в) окрасить мазок методом простого окрашивания и по Грамму;
г) рассмотреть в микроскоп с иммерсионной системой;
д) зарисовать и сделать вывод о чистоту культуры;
е) описать форму микробных клеток, характер их расположения, окрашивание по Грамму, наличие спор.
3. По окончании работы вымыть посуду согласно правилам, записанным в работе №1. сдать дежурным и лаборанту.
После выполнения задания студент должен уметь:
1. Выполнять окрашивание мазка по Грамму.
2. Делать вывод о чистоте выделенных культур.
3. Делать описание колоний.
Задание для отчета: По каждому пункту описать наблюдения и выводы.
Вопросы для самопроверки:
1. Техника микроскопирования.
2. Методика приготовления сложного окрашенного препарата.
Методы исследования
Описание колоний
1. Форма колонии – круглая, округлая, исправленная, корневидная, эллипсовидная и т. д.
2. Величина (выражается в мм ее диаметра). Принято считать колонии дот 1 мм точечными или росинчатыми, с диаметром 1 – 2 мм – мелкими, 2 – 4 мм – средними и диаметром больше 4 мм – крупными.
3. Цвет (обуславливается пигментом) – белый, красный, сине-зеленый, желтый, оранжевый. Микробы, не образующие пигмента, имеют колонии серовато-белые (бесцветные).
4. Поверхность – плоская, выпуклая, куполообразная, плосковыпуклая, с приподнятыми и вдавленным центром, с приподнятыми краями и т. д.
5. Характер поверхности – гладкий, морщинистый, исчерченный, боровчатый, извилистый.
6. Блеск поверхности – блестящий, матовый, тусклый.
7. Прозрачность – прозрачная, непрозрачная, полупрозрачная.
8. Характер краев колонии – ровные, волнистые, дольчатые, локонообразные, фестончатые, лопастные, бахромчатые, зазубренные, корневидные, не резко очерченные, т. е. расплывчатые и т. д.
9. Структура колонии – мелкая и крупнозернистая, радикально и концентрически очерченная, пестрая, чешуйчатая, струйчатая, гомогенная.
Окраска по Грамму.
1. На предметном стекле готовиться фиксированный мазок так же, как и для простого окрашивания.
2. На мазок положить фильтровальную бумагу и нанести 2 – 3 капли краски Грамма. Через 2 мин. Смыть водой или на мазок положить бумажку под синеву. На нее нанести 2 – 3 капли воды, а через 2 мин. бумажку отбросить и краску смыть струей воды.
3. Нанести 3 – 4 капли раствора Люголя и через 2 мин смыть струей воды.
4. Препарат погрузить в стаканчик с 96% этиловым спиртом (или на мазок налить спирт) и через 30 – 40 сек. Спирт тщательно смыть водой.
5. Окрасить фуксином Пфейфера в течение 1 – 2 мин., промыть водой и высушить фильтровальной бумагой.
Промикроскопировать препарат в иммерсионной системе.
В результате окрашивания препарата по методу Грамма одни виды бактерий (также дрожжи и актиномицеты) окрашиваются в фиолетовый цвет (Грам положительный – «+»), а другие – в красный цвет (Грамотрицательный – «-»).
Краской грамма (в фиолетовый цвет) окрашиваются те клетки микроорганизмов, в цитоплазме и цитоплазматической мембране которых содержатся вещества (магниевая соль, РНК и др.), прочно связывающие генцианвиолет и йод (из раствора Люголя). При кратковременной обработке препарата 96% этиловым спиртом такие не обесцвечиваются и остаются такими же и после окрашивания фуксином Пфейфера.
Не окрашиваются краской Грамма те клетки микроорганизмов, в цитоплазме которых отсутствуют вещества, взаимодействующие с генциавиолетом и йодом. При обработке препарата 96% спиртом через 30 – 40 сек. такие клетки обесцвечиваются, и поэтому они окрашиваются фуксином Пфейфера в красный цвет.
Работа 4. Изучение морфологических, свойств микроорганизмов путем микроскопирования
Содержание работы:
1. Умение приготовления окрашенного препарата из колонии и определение формы бактерий.
Оборудование, приборы и материалы: Посевы от предыдущей работы; игла, петля; предметные стекла; микроскоп, осветитель; все для простого окрашивания.
До занятия студент должен знать:
1. Устройство микроскопа.
2. Технику микроскопирования.
3. Методику приготовления окрашенного препарата.
Выполнение работы:
1. Приготовить окрашенный препарат из колонии (выбранной в предыдущем занятии).
2. Промикроскопировать в объектив 90, в иммерсионную систему.
3. Определить форму бактерий, наличие спор у бактерий.
4. Зарисовать, сделать вывод о чистоте культуры.
После выполнения задания студент должен уметь:
1. Микроскопировать в объектив 90.
2. Готовить простой окрашенный препарат.
Задание для отчета: записать дату проведения, №, наименование, содержание и выполнение работы. Зарисовать увиденную картинку под микроскопом в тетрадь.
Вопросы для самопроверки:
1. Техника микроскопирования.
2. Методика приготовления простого окрашенного препарата.
Методы исследования
Приготовление окрашенного препарата
Приготовление мазка заключается в следующем. На середину чистого обезжиренного предметного стекла наносят стерильной петлей жидкую бактериальную культуру или каплю стерильной водопроводной воды и вносят в нее бактерии, взятые из колонии кончиком стерильной бактериологической петли. Полученную слабо мутную бактериальную суспензию равномерно распределяют по площади 2 см2.
Высушивание мазка осуществляется при комнатной температуре или (для ускорения) в токе теплового воздуха над небольшим пламенем горелки (мазком вверх), не допуская нагрева стекла.
Фиксация мазка осуществляется термическим и химическим способами. При термическом способе стекло с высушенным мазком проводят 3 – 4 раза через пламя горелки той стороной, где нет мазка. При химическом способе мазки микробов фиксируют метиловым спиртом, смесью этилового предметного стекла с мазком в жидкость на определенное время. Цель фиксации – убить клетки микроорганизмов и прикрепить их к стеклу. Мертвые клетки окрашиваются лучше, чем живые.
Окрашивание мазка можно осуществлять разными способами, которые делят на простые и сложные. При простом окрашивании препарата на охлажденный зафиксированной мазок наносят 2 – 3 капли раствора какой-либо краски. После окрашивания мазка в течение 30 – 6 сек. краску смывают фильтровальной бумагой, прикладывая ее к мазку с обеих сторон. Микросокопируют окрашенный препарат в иммерсионной системе микроскопа.
Работа 5. Микробиологический контроль воздуха, воды.
Содержание работы: приобретение навыков по исследованию воздуха и питьевой воды по микробиологическим показателям.
Оборудование, приборы и материалы: Стерильные чашки Петри; стерильные пипетки на 1 см3; стерильные пипетки на 10 см3; стерильные пробирки; колбы стерильные на 500 см3; колбы стерильные на 100 см3; кусочки ваты стерильной; плитка электрическая; спиртовки, спички; питательные среды: КМАФАнМ, ДП, ГПС
До занятия студент должен знать:
1. Исследование воздуха производственных помещений и питьевой воды.
Какие питательные среды используются для посевов. Как правильно произвести отбор проб питьевой воды и воздуха для микробиологических исследований.Выполнение работы:
Произвести отбор проб воды питьевой для исследований. Произвести посев воды на питательную среду КМАФАнМ. Произвести посев питьевой воды на глюкозопептонную среду для постановки первой бродильной пробы воды. Произвести посев воздуха на питательную среду КМАФАнМ. Произвести посев воздуха на питательную среду ДП.После выполнения задания студент должен уметь:
Правила отбора проб питьевой воды из водопроводного крана для микробиологических исследований. Произвести посевы воздуха производственных помещений и питьевой воды с соблюдением правил стерильности на плотные и жидкие питательные среды.Задание для отчета:
Записать дату проведения, №, наименование, содержание и выполнение работы. Оформить таблицы №1, №2.
Анализ воздуха.
Таблица №1.
Что сделано | Питательная среда | Цель | Выросло колоний | Оценка качества |
Анализ питьевой воды.
Таблица №2.
Что сделано | Питательная среда | Объем засеянной воды | Выросло колоний или забродило пробирок | Оценка качества |
Вопросы для самопроверки:
Методика посева питьевой воды на питательную среду ГПС (глюкозопептонная среда). Методика посева питьевой воды и воздуха на питательную среду КМАФАнМ. Методика посева воздуха на питательную среду ДП.Методы исследования
Анализ воздуха.
Воздух производственных помещений исследуется на общую бактериальную обсемененности или количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ) и плесневых грибов и дрожжей.
Исследование воздуха на общую бактериальную обсемененность производят по питательным средам:
КМАФАнМ – питательная среда для определения количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.
МПА – мясопептонный агар.
Исследование воздуха на наличие дрожжей и плесневых грибов производят по питательным средам:
СА – сывороточный агар;
Сабуро - питательная среда для определения дрожжей и плесневых грибов.
Методика посева воздуха.
Взять две стерильные чашки Петри. С соблюдением правил стерильности в первую чашку Петри наливается примерно 10 см3 среды КМАФАнМ, во вторую – 10 см3 среды ДП. Круговыми движениями руки равномерно распределить среду по дну чашки Петри. Для контроля стерильности рекомендуется чашки Петри выдерживать в термостате 24 часа. Таким образом чашка приготовлена для посева.
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 |
