Микробиология и биология: Лабораторные работы по изучению (стр. 3 )

Работа 1. Правила работы и поведения в микробиологической лаборатории.

Устройство микроскопа. Микроскопирование плесневых грибов и дрожжей.

Содержание работы:

1.  Ознакомление с правилами работы и поведения в микробиологической лаборатории, ознакомление с оборудованием лаборатории.

2.  Изучение устройства микроскопа.

3.  Приобретение навыков по микроскопированию в объектив 8.

4.  Приобретение навыков по микроскопированию в объектив 40 и 90.

5.  Умение приготовления простого окрашенного препарата.

Оборудование, приборы и материалы: предметные стекла; покровные стекла; микроскоп; выращенная плесень; спиртовка; петли; полотенца.

До занятия студент должен знать:

1.  Строение плесневых грибов, их роль в молочной промышленности.

2.  Устройство микроскопа.

3.  Правила работы и поведения в микробиологической лаборатории.

4.  Строение, размножение и роль дрожжей в молочной промышленности

5.  Методику приготовления окрашенного препарата (простое окрашивание).

Выполнение работы:

1.  Подготовить микроскоп к работе.

2.  Микроскопирование плесневых грибов (головчатый плесени) увеличение 120 раз

3.  Промикроскопировать препарат дрожжей в объектив 40:

-  приготовить раздавленную каплю;

-  поместить на предметный столик и навести поле зрения;

-  смотреть в окуляр и поднимать тубус до тех пор, пока не появится изображение;

-  микровинтом, делая пол оборота в ту или иную сторону, навести резкость, четкость изображения;

-  рассмотреть различные участки исследуемого препарат, отмечая форму клетки, внутриклеточную зернистость, светлые пятна вакуолей, найти почкующиеся клетки и клетки со спорами;

-  убедиться в отсутствии подвижности.

4.  Зарисовать, отмечая различную форму дрожжей и высчитать увеличения микроскопа.

5.  Промикроскопировать готовый окрашенный препарат в объектив 90.

6.  Зарисовать.

После выполнения задания студент должен уметь:

1.  Готовить препарат – раздавленная капля.

2.  Готовить микроскоп к работе.

3.  Микроскопировать препарат дрожжей объективом 90.

4.  Микроскопировать готовый окрашенный препарат в иммерсионной системе объективом 90.

5.  Определять силу увеличения микроскопа.

Оформление работы: записать дату проведения, №, наименование, содержание, порядок выполнения работы. Промикроскопировать препарат «раздавленная капля» и зарисовать в тетрадь.

Вопросы для самопроверки:

1.  Техника микроскопирования.

2.  Методика приготовления простого окрашенного препарата.

Работа 2. Посев на питательные среды и выращивание микроорганизмов.

Содержание работы:

1.  Ознакомление со способами выделения чистых культур.

2.  Приобретение навыков посева микроорганизмов на разные питательные среды.

Оборудование, приборы и материалы: Стерильные пробирки; стерильные чашки Петри; стерильные пробки; бактериологические петли, иглы; спиртовка, спички; стерильные шпатели Дригальского; стерильные пипетки на 1 мл; стерильное обезжиренное молоко; сырое молоко; физ. раствор; дезинфицирующий раствор; земля, настой сена, простокваша; среды: КМАФАнМ, СДА. чашки Петри с посевами; закваска термофильных стрептококков и болгарской палочки.

До занятия студент должен знать:

1.  Методику выполнения посева по методу Дригальского на среду КМАФАнМ.

2.  Методику проведения посева уколом, штрихом.

3.  Методику посева на молочный агар.

4.  Методику посева на среды ЭНДО, СДА.

Выполнение работы:

1.  Работать бригадой по 4 человека:

-  1. анализ по Дригальскому;

-  2. анализ уколом, штрихом;

-  3. повес на среду СДА;

-  посев на среду МА.

2.  Подготовить среды: питательный агар КМАФАнМ разлить в 2 чашки Петри.

3.  Заготовить 2 пробирки с КМАФАнМ

-  столбиком – 1-ая пробирка;

-  скошенный агар – 2-ая пробирка.

4.  Заготовить пробирку для среды СДА,

5.  Заготовить чашку Петри для молочного агара.

6.  Заготовить чашку со средой ЭНДО.

Произвести посевы.

7.  Посев по методу Дригальского на чашки Петри со средой КМАФАнМ (почву, сенной настой, гнилой помидор, сырое молоко, простокваша само квасная, молочнокислые палочки, молочнокислые стрептококки).

8.  Посев на среду СДА (в пробирку почву, почву, сенной настой, гнилой помидор, сырое молоко).

9.  Посев на среду КМАФАнМ (пробирка со столбиком) уколом взять колонии.

10.  Посев штрихом на скошенный агар КМАФАнМ. Исследовать колонию

11.  Посев на молочный агар.

После выполнения задания студент должен уметь:

1.  Выполнять посев по методу Дригальского.

2.  Проводить посев уколом, штрихом.

3.  Проводить посев на молочный агар.

4.  Провести посев на среды ЭНДО, СДА.

Задание для отчета: записать дату проведения, №, наименование, содержание и выполнениеработы.

Вопросы для самопроверки:

1.  Техника микроскопирования.

2.  Методика приготовления сложного окрашенного препарата.

Методы исследования

Посев микроорганизмов.

При посеве из пробирки в пробирку необходимо:

1.  Зажечь спиртовку или горелку.

2.  Взять в левую руку две пробирки: одна – из которых будет производиться посев, другая – со свежей питательной средой (ближе к себе).

3.  Прокалить бактериологическую петлю в пламени горелки.

4.  Открыть пробку, захватив одновременно обе пробки мизинцем правой руки.

5.  Обжечь края обеих пробирок.

6.  Внести петлю в пробирку с посевом микроорганизмов, захватив каплю жидкости (если микробы выращены в жидкой среде) или частицу микробного налета ( с поверхности плотной среды), перенести ее, не касаясь стенок пробирки, в пробирку со свежей питательной средой. Если нужно произвести посев на каждую поверхность плотной питательной среды в пробирке, то проводят петлей по этой поверхности (посев штрихом), а когда сеют в жидкую питательную среду, то петлю споласкивают в ней. Если необходимо произвести посев уколом, то иглу с микроорганизмами вводят вглубь питательной среды до дна пробирок.

7.  Обжечь в пламени обе пробки и края пробирок и одновременно закрыть обе пробирки.

8.  Обжечь петлю в пламени горелки.

В некоторых случаях пользоваться петлей неудобно, например, необходимо произвести посев, пересев анаэробных бактерий, которые расположены в глубинных слоях жидкости, тогда пользуются пипеткой. Если необходимо произвести посев определенного количества жидкости, то пользуются градуированными пипетками. Набирают в пипетку жидкость и выпускают определенное количество, например 0,1 мл в свежую питательную среду. После посева использованные пипетки опускают в стакан с дезинфицирующим раствором.

Посев по Дригальскому.

Для получения отдельных колоний микроорганизмов на агаровых средах в чашки Петри производится посев по Дригальскому. Для этого на один из краев среды (после ее застывания на чашке Петри) наносят петлей или пипеткой каплю посевного материала и затем равномерно распределяют ее по поверхности среды, пользуясь предварительно простерилизованной изогнутой стеклянной палочкой – шпателем Дригальского. Шпатель, вынутый из бумаги, берут в правую руку. Левой рукой слегка приподнимается крышка чашки Петри, шпатель вносится в чашку и касается капли посевного материала, затем движениями шпателя от одного до другого края чашки Петри капля размазывается по поверхности агаровой пластинки. Надавливать шпателем на пластинку не следует, так как можно повредить агар.

Посев на СДА

Цель посева: Определение наличия анаэробных мезофильных бактерий.

В пробирку на дно кладут посевной материал и заливают расплавленной средой СДА и оставляют до застывания и после этого заливают сверху водным агаром для создания анаэробных условий.

Температура культивирования 350С – 72 часа.

Обработка данных: наличие спор определяют по появлению разрывов агарового столбика, образующих при росте этих бактерий газами.

Посев на молочный агар.

(молоко + водный агар)

Содержание работы: Определение протелитических бактерий, то есть бактерии разлагающие белок.

В стерильную чашку Петри наливают 1 мл приготовленного разведения исследуемого объекта. Добавляют 2 мл стерильного молока и заливаем водным агаром, с соблюдением правил стерильности. Круговыми движениями руки размешивают и после застывания ставят на выращивание.

Температура культивирования 20 - 250С – 48 часов.

Учет: Подсчитываются только те колонии, вокруг которых имеется зона просветления.

Работа 3 Изучение морфологических, культуральных и биохимических свойств выделенных микроорганизмов.

Содержание работы:

1.  Умение определения чистоты выделенных культур микроскопирование.

2.  Приобретение навыков по соблюдению асептики.

Оборудование, приборы и материалы: Посевы от предыдущей работы; игла, петля; предметные стекла; спиртовка, спички; метиленовая синь; чаша для слива, салазки, кружка с водой; фильтровальная бумага; все для окрашивания по Грамму: краска Грамма, раствор Люголя, спирт, фуксин Пфейфера; микроскоп, осветитель.

До занятия студент должен знать:

1.  Цель посева по методу Дригальского.

2.  Виды бактерий, определяющие при посеве на среду СДА.

3.  Виды бактерий, определяющие при посеве на молочный агар.

4.  Технику микроскопирования.

5.  Устройство микроскопа.

6.  Методику простого окрашивания.

Выполнение работы:

1.  Завершить предыдущую работу:

а) сделать анализ выполненных посевов:

-  шпателем Дригальского;

-  на СДА;

-  уколом;

-  штрихом;

-  на молочный агар;

-  на среду ЭНДО.

2.  Проверить чистоту изолированных культур и описать морфологические свойства выделенных микроорганизмов;

а)  описать внешний вид колонии (форму, цвет, величину, поверхность, прозрачность);

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах: 1 2 3 4 5