Уровень прозрачных растворов устанавливают по нижнему краю мениска, непрозрачных – по верхнему.

Рис. 3. Выливание раствора из пипетки

Мерные колбы применяют для приготовления заданного объема раствора. Они представляют собой плоскодонные сосуды различной вместимости (рис 2, г). На горлышке колбы имеется метка, а на самой колбе указана ее вместимость в миллилитрах при определенной температуре. Для приготовления раствора в колбу наливают немного растворителя, вносят вещество и растворяют его. Потом наливают растворитель на 0,5-1,0 см ниже метки, после чего доводят до метки, добавляя растворитель по каплям из пипетки. Затем плотно закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают раствор, переворачивая колбу несколько раз.

Фильтрование – это процесс механического разделения твердых и жидких компонентов смеси. Наиболее распространенными являются бумажные фильтры. Когда целью фильтрования является выделение твердого осадка, фильтрование проводят через простой гладкий фильтр. Простой фильтр готовят из квадратного куска фильтровальной бумаги, перегибая его, как показано на рисунке 6, а.

Рис. 3. Изготовление фильтров: а – простого; б – складчатого

Готовый фильтр должен быть на 3-4 мм меньше воронки. Его развертывают в конус и помещают в воронку так, чтобы он плотно прилегал к стенкам. Затем воронку помещают в кольцо штатива, подставляют под нее стакан, наливают в воронку немного дистиллированной воды и дают ей стечь.

При фильтровании, не взмучивая осадка, сливают жидкость по стеклянной палочке на фильтр. В стакан с осадком наливают немного чистого растворителя, перемешивают с осадком и снова осторожно сливают жидкость по палочке на фильтр. Такая операция называется декантацией. После нескольких декантаций последнюю порцию растворителя перемешивают с осадком и сливают на фильтр. Когда вся жидкость стечет, промывают осадок на фильтре 2-3 раза чистым растворителем.

Если целью фильтрования является получение жидкости, освобожденной от механических примесей, то применяют складчатый фильтр (рис 3, б). При фильтровании сливают взмученную жидкость вместе с осадком по стеклянной палочке на фильтр.

Оптический микроскоп (рис. 4) представляет собой прибор, предназначенный для изучения невидимых невооруженным глазом объектов. Он состоит из двух систем: механической и оптической. Механическая система включает штатив, тубус, револьверное устройство, предметный столик, макро - и микровинты.

Нижняя часть штатива называется ножкой микроскопа, верхняя - колонкой, которая служит как бы ручкой для переноса микроскопа. В верхней его части вставлен окуляр, к нижней части прикреплен вращающийся по кругу револьвер с гнездами для объективов. Тубус вместе с колонкой передвигается вверх и вниз при помощи макрометрического и микрометрического винтов. Наиболее четкое изображение объекта исследования достигается тогда, когда расстояние от объектива до

Рис. 4. Оптический микроскоп.

рассматриваемого объекта равно фокусному расстоянию фронтальной линзы объектива. Следует помнить, что микрометрический винт, полный поворот которого передвигает тубус микроскопа на 0,1 мм, является одной из наиболее хрупких частей микроскопа и обращение с ним требует особой осторожности. Микровинт не следует вращать более чем на 1-1,5 оборота, им пользуются после обнаружения объекта исследования, добиваясь четкого изображения. Предметный столик прикреплен к колонке. На столик помещают исследуемый препарат и закрепляют его зажимами (клеммами). Предметные столики бывают подвижные. Перемещение столика в горизонтальной плоскости осуществляется винтами. В середине столика имеется отверстие для освещения препарата лучами света, направляемыми через конденсор от зеркала микроскопа.

О п т и ч е с к а я с и с т е м а микроскопа включает осветительный аппарат, объективы и окуляр. Осветительный аппарат состоит из зеркала и конденсора с диафрагмой. Зеркало имеет плоскую и вогнутую поверхности. Оно вращается в двух взаимно перпендикулярных направлениях и служит для отражения света и направления его через конденсор на просматриваемый препарат. Конденсор состоит из линз, собирающих лучи, идущие от зеркала в одну точку. При микроскопии окрашенных препаратов конденсор должен быть поднят до предметного столика; при работе с неокрашенными препаратами конденсор опускают, т. е. микроскопию проводят в затемненном микроскопе. В конденсор вмонтирована диафрагма, при помощи которой также регулируют количество света, поступающего в него. Окрашенные препараты рассматривают при открытой диафрагме, а при изучении неокрашенных объектов необходимо несколько ограничить пучок света, прикрыв диафрагму, чтобы создать контрастность. Объективы - наиболее важная и ценная часть, определяющая оптическую мощность микроскопа. Объектив состоит из системы линз, склеенных канадским бальзамом и заключенных в металлическую оправу. Окуляры состоят из двух линз: верхняя - главная, нижняя - собирательная. Биологический микроскоп имеет три типа окуляров с увеличением в 7, 10 и 15 раз. Общее увеличение микроскопа равно произведению увеличения объектива на увеличение окуляра.

Приготовление окрашенных препаратов. Изучение морфологии микроорганизмов в окрашенном состоянии является наиболее распространенным методом в микробиологии. Этот метод имеет ряд достоинств: позволяет изучить морфологические особенности микроорганизмов и дает возможность найти различие между ними; он безопаснее в практической работе; доступен, благодаря сравнительной простоте техники окрашивания.

Для приготовления окрашенного препарата необходимо иметь бактериологическую петлю или пастеровскую пипетку, предметное стекло, исследуемые культуры микроорганизмов или исследуемый продукт, стерильную воду, газовую горелку или спиртовку, набор растворов для окраски, фильтровальную бумагу для высушивания окрашенного препарата. Для приготовления мазка чаще используют бактериологическую петлю (рис. 7), представляющую собой хромоникелевую проволоку длиной около 8 см, диаметром 0,4-0,5 мм, зажатую в металлическом держатель. Бактериологические петли до и после использования фламбируют, т. е. проводят через пламя горелок, при этом их держат вертикально над пламенем. Мазки готовят на чистых, обезжиренных предметных стеклах размером 76х26х2мм. Приготовление препарата включает: а) приготовление мазка; б) его высушивание; в) фиксацию; г) окраску.

Рис. 7. Петли Пастера

Рис. 8. Схема последовательности работ при изготовлении мазка.

Для приготовления мазка из жидкой культуры бактериологической петлей берут каплю, наносят ее на предметное стекло и распределяют равномерными круговыми движениями по поверхности стекла таким образом, чтобы длина мазка была не меньше 1,5-2 см. Для приготовления мазка из культуры, выращенной на плотной питательной среде, предварительно на стекло наносят каплю стерильной водопроводной воды, а затем при помощи петли в эту каплю вносят немного культуры и равномерно распределяют ее в форме мазка. При взятии культуры микроорганизмов соблюдают необходимые меры стерильности(рис.8).

Пробирку с культурой помещают между большим и указательным пальцами левой руки, поддерживая ее средним пальцем в наклонном положении пробкой вверх. Правой рукой держат бактериологическую петлю и прокаливают ее на пламени. Мизинцем и ладонью правой руки захватывают верхушку ватной пробки, вынимают ее из пробирки и держат так, чтобы нижняя часть ее, находившаяся в пробирке, не касалась руки и окружающих предметов. Края пробирки обжигают на пламени и петлю, проведя через пламя, вводят в пробирку; охлаждают ее, касаясь внутренней стенки пробирки. Затем набирают немного культуры и вынимают петлю из пробирки, не пронося ее через пламя. Нижнюю часть пробки быстро проводят через пламя и вставляют в пробирку. После нанесения культуры на стекло необходимо прокалить петлю над пламенем горелки, чтобы убить оставшиеся микроорганизмы, и поставить ее в штатив. Границы мазка обводят на обратной стороне предметного стекла карандашом по стеклу. Это облегчает в дальнейшем его поиск.

Высушивание мазка. Мазок обычно высушивают на воздухе, в термостате. Подогревать препарат не рекомендуется, так как это может привести к пригоранию микроорганизмов к предметному стеклу.

Фиксация. Цель фиксации - убить микроорганизмы и тем самым обезопасить работу с ними; прикрепить мазок к стеклу; сделать микроорганизмы более восприимчивыми к окраске. Наиболее простой - фиксация нагреванием на пламени горелки (по Коху). Препарат берут за край стекла мазком вверх и проводят 1 раз тыльной стороной мазка через пламя горелки. Второй способ фиксации – химический. Для этого его помещают в сосуд с фиксирующей жидкостью. Абсолютный этиловый спирт фиксирует мазки в течение 15-30 мин; спирт-эфир в равных объемах - в течение 2-5 мин; метиловый и амиловый спирт - 5 мин.

Окрашивание. Цель – сделать микроорганизмы хорошо видимыми. Окрашенные мазки называются микроскопическими препаратами. Краску при помощи пипетки наливают так, чтобы весь мазок был покрыт ею. Окрашивание мазков проводят на подставке, находящейся над стеклянной ванной. По окончании окрашивания краску смывают струей воды или препарат промывают в сосуде с водой. После промывания для стекол препарат сушат между листками фильтровальной бумаги или оставляют в вертикальном положении для просушивания. Если на препарате останется вода, то, соединившись с иммерсионным маслом, она образует эмульсию, мешающую хорошему видению при микроскопии. после высушивания мазок микроскопируется сначала в объектив 8, потом при необходимости в объектив 90 (иммерсионная система).

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5