Методическое пособие к проведению практических занятий по клинической лабораторной диагностике (стр. 3 )

Нормальная моча практически не содержит белка. Почечная протеинурия может возникнуть вследствие поражения почек (орга­ническая) и без него (функциональная).

Функциональная протеинурия вызывается чаще всего увеличе­нием размеров пор почечного фильтра при сильных внешних раздра­жениях или же увеличением фильтрация и диффузии вследствие за­медления тока крови в клубочках. К функциональной относится транзиторная протеинурия, ортостатическая протеинурия, застой­ная протеинурия у больных сердечно-сосудистыми заболеваниями.

Органическая протеинурия возникает вследствие органическо­го повреждения нефрона (паренхиматозные заболевания почек).

Внепочечная_протеинурия обычно вызывается белковыми примесями при заболеваниях мочевых путей и половых органов. Такая протеинурия не превышает обычно 1 г/л.

Методы определения белка в моче

Качественные пробы:

1. Проба с сульфосалициловой кислотой - самая чувствительная из качественных проб. Результат обозначают следующим образом:

реакция слабо положительная (+), положительная (++), резко положительная (+++).

2. Проба с азотной кислотой.

3. Проба Bright с кипячением - денатурированный белок не рас­творяется в 6% уксусной кислоте в отличие от солей фосфатов.

Количественные методы:

1. Метод Робертсона-Стольникова. В основе метода лежит качественная проба с азотной кислотой.

2. Нейалометрический метод. Он основан на свойстве белка давать с сульфосалициловой кислотой помутнение, интенсивность кото­рого пропорциональна концентрации белка.

3. Биуретовый метод. Метод основан на способности белка давать с сернокислой медью и едкой щелочью фиолетового цвета биуретовый комплекс, насыщенность фиолетового цвета, прямо пропор­циональная количеству белка.

Определение уропротеинов Бенс-Джонса

Белки Бенс-Джонса - термолабильные микромолекулярные парапротеины (относительная молекулярная масса ), кото­рые встречаются главным образом при миеломной болезни и макро-глобулиномии Вальденстрема. Благодаря небольшому молекулярному весу α - цепи легко проходят из крови через неповрежденный почечный фильтр в мочу и могут быть определены с помощью реакции термопреципитации. Белки Бенс-Джонса преципитируют при 45-60°С, при дальнейшем нагревании осадок растворяется.

Определение сахара в моче

Выделение с мочой глюкозы называется глюкозурией. Причина глюкозурии - ограниченная способность канальцев реабсорбировать глюкозу.

Глюкозурия может быть временная (употребление избыточного количества сахара, при введении адреналина, волнении, испуге и т. д.) и постоянная (сахарный диабет, гипо - и гиперсекреция некоторых гормонов - тироксина, АКТГ, глококортикостероидов, ад­реналина).

Постоянная глюкозурия может быть при так называемом почечном диабете, когда понижается способность канальцевого эпителия реабсорбировать глюкозу. Напротив, глюкозурии может не быть, несмотря на гипергликемию, у больных со сморщенными почками, когда нарушается фильтрация сахара через склерозированные клубочки.

Методы определения глюкозы в моче

Качественные пробы:

1. Проба Гайнеса. Реакция основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в щелочной среде в гидрат заки­си меди (желтого цвета) или закиси меди (красного цвета).

2. Глюкооксидазная (нотатиновая) проба. В основе метода лежит окисление глякозы ферментом глюкооксидазой (нотатином), образующаяся при этом перекись водорода расщепляется перокисидазой и окисляет индикатор (производное бен-зидина), изме­няет его окраску.

Количественные методы:

1. Поляриметрический способ позволяет определить процент глю­козы в моче при помощи сахариметра. Угол вращения плоскости поляризации пропорционален содержанию глюкозы в моче.

2. Цветная реакция с ортотолуидином,

Определение кетоновых тел

Кетоновые тела - это ацетон, ацетоуксусная и β-оксимасляная кислоты. В норме с мочой выделяются минимальные количес­тва кетоновых тел, которые не обнаруживаются обычными качеств­енными пробами. Кетонурия - выделение с мочой большого количес­тва кетоновых тел. Она встречается при таких патологических состояниях, как сахарный диабет, голодание (особенно у детей в раннем возрасте - токсикозы, продолжительные желудочно-кишечные расстройства, дизентерия и т. д.).

Качественные пробы:

1. Проба с нитроприссидом натрия (проба Ланге).

2. Экспресс-методы с применением тестов кетофан и пентаран.

Определение желчных пигментов в моче

Из желчных пигментов в моче определяется билируоид и уробилиногеновые тела.

Определение билирубина

Нормальная моча содержит минимальное количество билирубина, которое не может быть обнаружено обычными качественными пробами. Увеличенное выделение билирубина - явление назологическое и называется билирубинурией. В мочу выходит только прямой билирубин, непрямой не может пройти через здоровый почечный фильтр. Билирубинурия возникает и проявляется при увеличении содержания прямого билирубина в крови выше 0,01-0,02 г/л (почечный порог билирубина).

Билирубинурия возникает в результате затруднения прохожде­ния образующихся в гепатоцитах желчных пигментов в тонкий кишеч­ник. Подобное состояние имеет место главным образом при двух типах желтух: печеночной или паренхиматозной (острые вирусные, токсические, токсико-аллергические гепатиты, различные виды цир­роза, гипоксические состояния, например, в тяжелых случаях сердечной недостаточности) и подпеченочной (нарушение проходимости внепеченочных желчевыводящих путей за счет воспаления, закупор­ки камнем, опухолью, рубцовой деформации).

Качественные пробы на билирубин

Большинство качественных проб на билирубин основано по его окислении йодом, азотной кислотой и т. д. в биливердин зеленого цвета. 1. Йодная проба (проба Розина). 2. Проба Гаррисона.

Определение уробилиногеновых (уробилиновых) тел.

Уробилиногенурия встречается при: паренхиматозных поражени­ях печени, гемолитических процессах, при кишечных заболеваниях, сопровождается усиленной реабсорцией стернобилиногена в кишечни­ке (энтероколиты, запоры, кишечная непроходимость).

1. Проба с сульфатом меди (проба Богомолова). Уробилиновые тела окрашивают хлороформ в розово-красный цвет.

2. Проба флоракса.

3. Проба Найбауэра.

МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОСАДКА МОЧИ

Элементы мочевого осадка, видимые под микроскопом, разде­ляются на неорганизованные (различные соли) и организованные (клеточные элементы и цилиндры).

Организованный (органический) осадок

Эпителиальные клетки - полигональные, "хвостатые", круглые.

Лейкоциты - в нормальной моче встречаются единичные в поле зрения лейкоциты (0-2 у мужчин и 1-2 у женщин). Чтобы правильно оценить количество лейкоцитов в осадке, необходимо собирать мочу после тщательного туалета промежности, особенно у женщин.

Выделение лейкоцитов с мочой выше нормы - явление патоло­гическое и называется лейкоцитурией (от 5-6 до 20 лейкоцитов в поле зрения) или пиурией (60-100 лейкоцитов в поле зрения). Лейкоцитурия чаще встречается при воспалительных процессах в поч­ках и мочевыводящих путях (пиелонефриты, апостематозные нефриты, циститы, уретриты), но может обнаруживаться и при не воспалительных заболеваниях (нефротический синдром, волчаночная почка).

Эритроциты - в нормальной моче встречаются единичные пре­параты эритроциты. Нахождение их в каждом поле зрения - явле­ние патологическое. Выделение эритроцитов с мочой называется гематурией. Если кровь в моче обнаруживается макроскопически, то это микрогематурия. Бывают так называемые ложные гематурии, при которых кровь к моче примешивается из половых органов.

Цилиндры являются белковыми слепками канальцев: белок, по­падая в канальцы, свертывается, принимает их форму и затем вы­деляется с мочой. Появление цилиндров в осадке мочи называется цилиндрурией. Цилиндрурия является верным признаком органичес­кого заболевания почек.

Цилиндры могут быть чисто белковыми или могут иметь на белковой основе различные налипшие элементы. К чисто белковым относятся гиалиновые и восковидный цилиндры.

Если поверхность белкового цилиндра плотно покрыта эритроцитами, лейкоцитами, эпителиальными клетками, то такие ци­линдры называются соответственно эритроцитарными, лейкоцитарными, эпителиальными.

Если налипшие элементы подверглись дегенеративному распаду, то любой из перечисленных выше цилиндров может стать зернистым: Грибы, Слизь, Бактерии, Микобактерии туберкулеза.-

Жир присутствует в осадке мочи при хроническом нефрите с нефротическим синдромом, диабета, пиелонефрите, халурии и др.

Для обнаружения жира смешивают каплю осадка мочи с 2-3 каплями насыщенного раствора судана III в 70% этиловом спирте.

Кристаллурия - выпадение в осадок солей, патогенетическая основа мочекаменной болезни (уролитина) и многих форм хроничес­кого и интерстициального нефрита.

Гиперкальциурия - может способствовать развитию тяжелого поражения почек нефрокальцинозу.

Гипаруриноурия - характерный синдром подагры.

Фосфатурия - первичная характеристика для гиперпаратиреоза, синдрома Фанкони; вторичная - для пиелонефрита, цистита.

Неорганизованный (неорганический) осадок. Характер неорга­низованного осадка мочи зависит от реакции мочи в кислой среде, встречаются мочевая кислота, ураты, оксалаты и др., а в щелочной среде - аморфные фосфаты, трипельфосфаты, мочекислый аммоний.

ФИЗИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МОЧИ - ПЛОТНОСТЬ

Физические свойства мочи - плотность зависит от количества растворенных плотных веществ выпитой жидкости, отражает концент­рационную способность почек.

Физиологическая – при физиологической полиурии.

Патология – гипостенурия: в сочетании с полиурией поражение канальцевого аппарата, сморщивание почек в сочетании с олигурией – вовлечение в патологический процесс клубочков (нарушение процесса образования первичной мочи).

Область нормы – от .

Физиологическая – при физиологической олигурии.

Патология гиперстенурия: протеинурия – ренальная: а. органическая (клубочковая, канальцевая); б. функциональная, экстраренальная.

Глюкозурия – физиологическая: а. алиментарная; б. эмоциональная.

Патологическая глюкозурия () бывает инсулярная - при нарушении функции эндокринных желез (сахарный диабет, панкреатит) и экстраинсулярная при патологии щитовидной железы, надпочечников, гипофиза, а также при травмах, опухолях мозга, заболеваниях печени и нервной системы.

Клиническая оценка

Ориентировочный, количественные и специальные методы мик­роскопического исследования осадка мочи служат основными в ди­агностике важных симптомов почечных заболеваний - лейкоцитурии и гематурии.

Лейкоцитурия: почечная: инфекционная

асептическая

из нижних мочевых путей

Пиурия - массивное выделение лейкоцитов (гноя) с мочой.

Гематурия - встречается почти при всех заболеваниях почек и мочевыводящих путей, нередко служат ранним и ведущим проявле­нием мочевого синдрома. По интенсивности эритроцитурии выделяют микрогематурию и макрогематурию.

Количественные методы - включают подсчет количества выде­ленных с мочой форменных элементов с помощью счетных камер (ка­мера Горяева или Фукса-Розенталя) в определенном объеме (напри­мер, в 1 мл) или за определенное время (сутки, минуту).

Метод Каковского-Аддиса используют для определения коли­чества форменных элементов в моче, собранной за сутки. В норме за сутки с мочой может вселиться до 2 • 104 лейкоцитов, 1 • 106 эритроцитов и не более 2 • 104 цилиндров.

Метод Нечипоренко - исследование мочи по Нечипоренко. Для исследования берут среднюю порцию утренней мочи. Определяют ее рН (при щелочной реакции мочи могут частично разрушаться фор­менные элементы). Затем тщательно перемешивают и отмеривают 10 мл или 5 мл, центрифугируют 3 мин при 3000 об/мин, отсасывают пи­петкой 8 мл надосадочной жидкости. Оставшуюся мочу с осадкой в количестве 1 мл (1000 мкл) или 0,5 мл (500 мкл) тщательно взбал­тывают и заполняют камеру Горяева. Подсчет лейкоцитов, эритроци­тов и цилиндров производят в 100 больших квадратах. Количество форменных элементов в 1 мл мочи определяется по формуле:

х = у • 4000 • 1000

1600 • 10

где у - число форменных элементов в 100 больших квадра­тах; 1600 - число малых квадратов в 100 больших квадратах;

1/4000 мкл - объем малого квадрата; 10 - отношение объема центрифугированной мочи к объему надосадочной жидкости с осад­ком, взятых для микроскопического исследования (соблюдение это­го соотношения позволяет не изменять расчетную формулу, если для центрифугирования берут меньше мочи); 1000 - количество мкл в 1 мл.

В норме количество лейкоцитов в 1 мл - до 4000, эритроци­тов - до 4000, цилиндров - до 20 (нормы для взрослых и детей одни и те же).

Контрольные вопросы:

1. Что характерно (полиурия, олигурия, анурия) для следующих состояний: острого нефрита, хронической почечной недостаточнос­ти, сахарного диабета, терминальной стадии сердечной недостаточности, выраженного нефротического синдрома?

2. От чего зависит относительная плотность мочи?

3. О какой функции почек можно судить на основании проба

Зимницкого?

4. Как химически отличить мутность, обусловленную: 1) уратами от фосфатной; 2) солями от белковой?

5. Какими методами определяют белок в моче?

6. Чем характеризуется уропротеинограмма при тяжелом почечном поражении?

7. Какова реакция мочи при: диабетической коме, мочекислом диатезе, остром нефрите, острой почечной недостаточности, застойной почке?

8. Встречается ли глюкозурия без гипергликемии?

9. При какой патологии появляются в моче желчные пигменты?

10. Для какого заболевания характерна моча в виде мясных помоев, темно-бурого цвета, бледно-водянистого цвета?

11. Какое заболевание сопровождается пиурией, гемоглобинурией?

12. Какими методами можно выявить качественные особенности лейкоцитов?

13. Какими методами определяют степень лейкоцитурии?

14. При каком заболевании в моче обнаруживается большое количество аморфных фосфатов и трипельфосфатов?

ГЕЛИК-ТЕСТ В ДИАГНОСТИКЕ HELICOBACTER PYLORI

Геликобактериоз – хроническое антропонозное инфекционное заболевание, вызываемое бактериями, обладающими тропностью к эпителию желудка и двенадцатиперстной кишки.

Helicobacter pylori (H. pylori) – грамотрицательная спиральная бактерия, впервые выделенная из ткани желудка R. Warren и B. Marshall в 1982 г., играет важную роль в развитии целого ряда заболеваний: хронического гастрита, пептической язвы, аденокарциномы, MALT – лимфомы (8,10). Место обитания НР – слизистая оболочка желудка. Более чем 90% бактерий находятся в слое слизи, покрывающем желудочный эпителий, 10% - непосредственно контактируют с поверхностью клеток желудочного эпителия. Продвижение НР по вязкой слизи обеспечивается наличием 5-6 жгутиков. Важным фактором, повышающим выживаемость бактерий, является ее способность продуцировать уреазу (9,10). Этот фермент осуществляет гидролиз мочевины до двуокиси углерода и аммиака. Бактерия защищается от воздействия кислоты «аммиачным облаком», в то же время аммиак повреждает клетки эпителия желудка, нарушая клеточное дыхание и энергетический обмен. В результате разрушается желудочный барьер, усиливается цитотоксический эффект нейтрофилов, что приводит к вакуолизации клеток (7,10) К настоящему времени имеется достаточное количество сведений о природе НР, расшифрован геном бактерии, изучен патогенез заболеваний, связанных с персистенцией НР в организме человека, в том числе язвенной болезни желудка (ЯБ) и двенадцатиперстной кишки. В геноме НР имеются гены, ассоциированные с повышенной патогенностью микроорганизма (6,7). Это, в частности, vac A, cag A, ice A, bab A. Штаммы НР, содержащие все три патогенных гена, ассоциируются с атрофическим гастритом, кишечной метаплазией, усилением пролиферации желудочного эпителия в антральной части желудка и предрасполагают к развитию рака желудка (4,5).

Частота заселения слизистой оболочки HР зависит в основном от социально-экономических условий и возраста. В группах населения с низкими доходами выявляется более высокая инфицированность, распространенность HР в городе значительно выше, чем в сельской местности и увеличивается с возрастом. В России, по данным РГА, инфицированность HР среди подростков составляет 50%, среди взрослого населения 80-90%. По литературным данным (, ,2003) при случайной репрезентативной выборке детей, подростков и взрослого населения г. Новосибирска сероположительными в отношении хеликобактерной инфекции оказались среди детей – 43 %, подростков 55,4 % и взрослых 88,4 %.Наиболее вероятный путь распространения инфекции – фекально-оральный (3).

Считают, что НР – особый патоген, который у большинства инфицированных вызывает хронический хеликобактерный гастрит, о наличии которого большинство пациентов и не догадывается, так как он протекает бессимптомно. И лишь крайними исключениями являются либо язвенная болезнь и рак, либо полное отсутствие заболевания. Таким образом, НР, приспособившись в результате длительной эволюции, регулирует у большинства инфицированных иммунную систему так, что ее ответ становится неопасным ни для бактерии, ни для хозяина.

Надеяться на самоизлечение от Нр-инфекции наивно. Оно возможно только тогда, когда ресурсы «экологической ниши» для НР будут исчерпаны, т. е. когда разовьется выраженный атрофический гастрит, кишечная метаплазия, снизится желудочная секреция и НР исчезнут, совершив «щелочное самоубийство», либо будут вытеснены другой популяцией микроорганизмов (грибов, лактобактерий и др.), для которых среда обитания станет пригодной.

Установлено, что НР усиливает пролиферацию эпителиоцитов, как в антральном отделе, так и в теле желудка. Нормализация пролиферации после эрадикации НР отличается в антральном отделе и в теле желудка. Если в антральном отделе она наступала сравнительно быстро, то в теле желудка нормализация происходила по прошествии 6 месяцев после эрадикации, так как лимфоцитарная инфильтрация уменьшается медленно по мере естественной элиминации клона лимфоцитов.

Антральный гастрит может быть как неатрофическим, так и атрофическим, часто – активным. Наиболее часто НР выявляются при неатрофическом гастрите, при атрофическом их находят реже. Допускают, что хеликобактерный фундальный гастрит, который, правда, встречается редко, может быть причиной развития гигантских складок слизистой оболочки, а антральный и пангастрит – эрозивных форм. При этом речь идет о хронических эрозиях, в которых в отличие от острых дно образовано фибриноидным некрозом и фибриноидом.

Клиника. У больных с хеликобактерным гастритом отмечаются неприятные ощущения (тяжесть, чувство переполнения, незначительная боль) в эпигастральной области. Боли носят ноющий характер, наступают после еды, продолжаются 1-1,5 ч, после чего самопроизвольно угасают. Боли более выражены после приема острой, жареной и жирной пищи, при быстрой (торопливой) еде и уменьшаются после отрыжки (воздухом, съеденной пищей). Боли (или чувство тяжести) носят постоянный и длительный характер, продолжаясь весь период обострения. У 70% больных выявляют гиперсекрецию соляной кислоты, у 30% - нормальную кислую продукцию. Характерна склонность к запорам. Иначе говоря, клиническая симптоматика сходна с таковой при язвенной болезни. Гастрит выявляется у 100% больных язвенной болезнью при любой локализации язвы, и поэтому его рассматривают как один из факторов язвообразования.

Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки, ассоциированная с НР, характеризуется более тяжелым течением и характерной морфологией. Обострения не носят сезонный характер, а характеризуются индивидуальным графиком с ремиссиями от 3 недель до 1 года.

Среди многочисленных осложнений встречаются кровотечение, перфорация и пенетрация язв, рубцовая деформация двенадцатиперстной кишки, пилоростеноз и др.

Возможно также бессимптомное течение хеликобактериоза, которое подтверждается лишь обнаружением возбудителя в слизистой оболочке желудка и ДПК. Максимальная продолжительность бактерионосительства в этом случае не установлена (1).

Методы диагностики Helicobacter pylori.

Различают 2 группы методов диагностики хеликобактериоза.

1.  Инвазивные (требуют биопсии)

- гистологический

- бактериоскопический

- бактериологический

- биохимический (уреазный тест)

2. Неинвазивные (не требуют биопсии)

- серологический

- ПЦР

- дыхательные

- определение антигена НР в кале (ИФА)

Инвазивные методы

Гистологические методы получили широкое распространение, так как позволяют быстро обнаружить Нр в биоптатах и одновременно изучить морфологические изменения в слизистой оболочке.

Частота выявления НР с помощью гистологического метода хорошо корригирует с другими методами и составляет не менее 75-80%. В последнее время разработаны новые методы, среди которых наиболее чувствителен иммуноцитохимический с применением моноклональных антител и комплекса авидин-биотин-пироксидазы.

Весьма обнадеживающие результаты получены при выявлении НР методом гибридизации ДНК в обычных парафиновых срезах. Методика не только чувствительна, но и высоко специфична, с ее помощью можно идентифицировать различные штаммы хеликобактера и понять природу повторного заражения после успешного лечения (новая ли эта инфекция или размножение сохранившихся бактерий).

Гистологический метод достаточно надежен и является «золотым стандартом» в диагностике хеликобактериоза.

Бактериоскопия – для цитологического исследования используются мазки-отпечатки (1-2 и более), полученные при эндоскопии из биоптатов слизистой оболочки антрального отдела желудка. Применяемые паноптические методы окраски позволяют выявить морфологические особенности строения ядер и цитоплазмы клеток слизистой оболочки, наличие Нр, ориентировочно оценить количество микроорганизмов.

При изучении НР в гистологических или цитологических препаратах можно выделить 3 степени обсемененности слизистой оболочки: 1 – слабая: до 20 микробных тел в поле зрения; 2 – умеренная: от 20 до 50 микробных тел в поле зрения; 3 – высокая: более 50 микробных тел в поле зрения. При обнаружении в мазках – отпечатках Нр выявляется также и клеточная инфильтрация, характеризующиеся наличием лимфоцитов, плазматических клеток, нейтрофилов и эозинофилов.

Бактериологический метод – культивирование НР на специальных средах, обогащенных протеином (кровяной, шоколадный агар), в микроаэрофильных условиях. Материалом исследования являются биоптаты из СО желудка или ДПК, полученные в условиях максимальной стерильности. На кровяной питательной среде хеликобактер на 3-5 сутки формирует мелкие круглые, гладкие, прозрачные, росинчатые колонии диаметром 1-3мм. В дальнейшем проводится идентификация выделенных культур, исследуются их морфологические, тинкториальные свойства, подвижность и другие специальные исследования в зависимости от возможностей и задач, стоящих перед исследователем. Метод позволяет оценить количественно рост микроба, идентифицировать его штамм и определить чувствительность к антибиотикам. ..

Биохимический – наиболее простой из инвазивных методов, основан на определении уреазной активности в биоптате. По скорости выявления персистирующей НР в СО цитологическому не уступает экспресс-метод, основанный на уреазной активности НР. Тест состоит из геля-носителя, содержащего 20г/л мочевины, бактериологического агента (0,02% азид натрия) и фенол-рота (0,05%) в качестве индикатора рН. Индикатор меняет цвет от желтого к малиновому, когда под действием уреазы происходит гидролиз мочевины с образованием аммиака, сдвигающего рН среды в щелочную сторону. Готовая стерильная среда разливается по 0,2 мл в плашки из синтетического материала. Биоптат СО, полученный при эндоскопии, помещают в углубление («луночку») плашки. Малиновое окрашивание теста, наступившее вслед за этим, свидетельствует о наличии в биоптате Нр. Изменение цвета среды происходит только в том случае, если в биоптате есть уреаза, «выработання» НР. Время изменения окраски теста косвенно свидетельствует о количестве жизнеспособных бактерий. Появление малинового окрашивания в течение первого часа соответствует значительной инфицированности СО НР (+++), в течение последующих двух часов – умеренной (++), к концу суток – незначительной (+), если же окрашивание наступает в более поздние сроки – результат считается отрицательным.

Неинвазивные методы

Среди неинвазивных методов в мире наиболее распространен серологический метод – определение в крови пациента методом ИФА специфических антител к НР. У всех больных, инфицированных НР, в СО желудка и, соответственно, в двенадцатиперстной кишке образуются антитела. Специфический гуморальный иммунный ответ против антигенов хеликобактера отчетливо регистрируется через 3-4 недели после инфицирования. Антитела могут быть определены различными методами (в реакции преципитации и др.), но наибольшее значение имеет метод иммуноферментного анализа (ИФА). Этим тестом выявляются антитела IgG, IgA, IgM классов в сыворотке крови, а также секреторные IgA, IgM в слюне и содержимом желудка. В практике используют ИФА по определению IgG и реже IgA-антител в сыворотке крови. Преимущество метода состоит в том, что он выявляет факт инфицирования не только при манифестных, но и при субклинических формах, а также в стадиях ремиссии заболевания. Следует также иметь в виду, что тест остается положительным еще не менее месяца после успешной ликвидации НР, а на ранней стадии, в течение 2-3 недель с момента инфицирования, тест оказывается отрицательным.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – определение по ДНК присутствия НР в желудке, высокочувствительный, но дорогой. Для определения ДНК НР в биоптатах используются праймеры, специфичные для фрагмента ure C гена НР. Фрагменты анализируемой ДНК проявляются в виде светящихся оранжево-красных полос при УФ-облучении с длиной волны 310 нм.

Дыхательные методы – наиболее простые и безопасные для больного, основаны на определении нарастания в выдыхаемом воздухе продуктов гидролиза принятой внутрь мочевины под влиянием уреазы хеликобактера.

В зависимости от регистрируемого в выдыхаемом воздухе вещества, существуют углеродные тесты (по С14 и С13) и аммиачные (аэротест, хелик-тест). В широкой клинической практике обычно применяют экспресс-методы. Они основаны на уреазной активности HР. Уреазный тест – наиболее простой и наименее дорогостоящий метод диагностики. Его преимущество – быстрое получение результатов. Он основывается на способности НР вырабатывать уреазу, которая превращает мочевину в аммиак и бикарбонат, что можно определить по изменению цвета индикатора.

Дыхательный тест с мочевиной – неинвазивный, необременительный для больного, высокочувствительный (95-96%) метод, проводится с использованием индикаторных трубок. Исследуемый в течение определенного времени дышит в трубку, в которую компрессором нагнетается выдыхаемый воздух. Затем ему предлагается выпить раствор, содержащий мочевину и через 3 минуты повторить тест. По характеру изменения окраски с помощью стандартных таблиц выявляется наличие и степень обсемененности HР.

Наиболее частая причина ложноотрицательных результатов – проведение дыхательного теста через слишком короткий промежуток времени после проведения лечения. Тест повторяют через 6 недель после завершения лечения и при подозрении на рецидив, когда эндоскопию выполнять не обязательно (1,2).

Для достоверной диагностики НР рекомендуют использовать не менее двух методов у каждого больного.

Основные методы диагностики Нр и показания к их применению

Инструкция по выполнению методики ГЕЛИК - тест (UBT-диагностика Helicobacter pylori) с использованием микрокомпрессора ELITE и индикаторной трубки ИТ-NH3

1.Вставить индикаторную трубку одним концом в шланг аспиратора (микрокомпрессор ELIT-801 или 802 модифицированный).

2.Поместить свободный конец трубки в ротовую полость обследуемого так, чтобы она находилась под углом 45 градусов к небу, но не касалась его.

3.Воткнуть штепсельную вилку аспиратора в розетку, таким образом включить его.

4.Засечь время, указанное на корпусе аспираторе при его градуировке. Для трубки ИТ-NH3 оно составляет 0,6+/-0,2 минуту и зависит от мощности и других рабочих характеристик аспиратора. По истечении этого времени трубку вынуть, а аспиратор выключить.

5.Вынуть трубку из шланга аспиратора.

6.Измерить высоту окрашенного столба линейкой (в миллиметрах). Полученное число означает базовую концентрацию аммиака в ротовой полости (С 1).Общая погрешность такого измерения 30%.

7.Дать обследуемому выпить раствор карбамида в 10 мл воды. Обязательно дать пациенту запить раствор карбамида 10 мл чистой воды (см. п.3 Примечания).

8.Спустя 3+/-0,5 минуты вновь вставить трубку в шланг аспиратора тем концом, который был свободен при первом измерении. Поместить конец трубки в ротовую полость под углом 45 градусов к небу, так, чтобы трубка не касалась его.

9.Вторично выполнить п. п.3-6. Полученное число означает нагрузочную концентрацию аммиака в ротовой полости в (С-2).

10.Вычесть из С-2 С-1.Полученное число означает нагрузочную концентрацию аммиака в ротовой полости в (/\С). Если приростом нельзя пренебречь, то есть он более 2 мм, то инфицирование НР присутствует. Для точной оценки можно воспользоваться номограммой и выполнить п. п.11-13 инструкции.

11.Отметить на номограмме точку по вертикальной оси и точку по горизонтальной оси.

12.Отметить точку пересечения линий параллельных осям из этих точек.

13.Оценить полученный результат по номограмме. Если точка пересечения лежит вне сектора эллипсов с центром в начале координат, то инфицирование НР несомненно. Если точка пересечения лежит в сектора первого эллипса, то есть вблизи от начала координат, то отсутствие инфицирования НР несомненно.

Примечание:

1.В упрощенном варианте оценки можно не измерять базальную концентрацию аммиака и не выполнять пункты 4-6 и 11-13, а после пункта 3 сразу приступить к п.7.

2. В случае высокой базальной концентрации (С 1 превышает 4 мм) тест на НР считается положительным и нагрузочное измерение можно не проводить, то есть методика сводиться к методике методика «АЭРОТЕСТ»). Пациента нужно обследовать и на лямблии (L) если показатели теста находятся в «красной» зоне.

3.При оценки уреазной активности ротовой полости (вариант контроля эрадикации НР в ротовой полости) ротовую полость ополаскивают указанным в п. 7 раствором карбамида и выплевывают его не проглатывая.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах: 1 2 3 4 5 6 7