Пути усовершенствования живой гриппозной вакцины и тактики ее применения при подготовке к пандемии (стр. 7 )

При смешанном заражении реассортантами А(Н1N1)+А(H5N2) наблюдалось достоверное снижение выделения смеси вирусов из легких по сравнению с показателями репродукции обоих штаммов, введенных по отдельности. При одновременном введении трех реассортантных вирусов современных циркулирующих разновидностей A(Н1N1)+A(Н3N2)+В уровень репродукции в легких не превышал таковых для отдельно взятых реассортантов А(Н1N1) или В. Добавление к трем реассортантам эпидемических вирусов штамма Лен 17/Н5 приводило к снижению титров выделения вирусной смеси из легких, хотя различия не были статистически значимыми.

Через 28 дней после иммунизации штаммом Лен 17/Н5 отдельно или в сочетании с реассортантным штаммом подтипа А(Н1N1) в сыворотках крови определялись сходные по значению титры нейтрализующих антител к вирусу подтипа Н5, в то время как при введении в составе тетравакцины наблюдалось достоверное снижение титров нейтрализующих антител (р=0,03). Результаты ИФА с использованием в качестве подложки очищенного НА гомологичного вируса Лен 17/Н5 подтвердили это наблюдение. После иммунизации моновакциной Лен 17/Н5 или дивакциной А(Н5N2)+А(Н1N1) средние титры специфических IgG к вирусу Н5 составили 3,4 и 3,2 lg соответственно. При введении реассортантного штамма Лен 17/Н5 в составе тетравакцины уровень вирус-специфических IgG не превышал 2,5 lg, то есть был достоверно ниже (р<0,001). Таким образом, было показано, что сочетанное введение реассортантов А(Н5N2) и А(Н1N1) не приводило к снижению иммуногенности в отношении компонента Н5, в то время как в составе тетравакцины реассортант Лен 17/Н5 оказался менее иммуногенным, чем при отдельном введении. Это явление согласуется с ранее полученными данными, когда в опытах in vitro было показано, что при равных заражающих дозах штаммы вируса гриппа В в гетерогенных смесях оказывались более сильными конкурентами по сравнению со штаммами типа А (Амвросьева с соавт., 1983).

Ранее в клинических испытаниях сезонных гриппозных вакцин было показано, что иммунизация моновалентной или дивалентной ЖГВ в сочетании с ИГВ приводит к появлению хорошо выраженного добавочного эффекта в отношении сероконверсий как сывороточных, так и секреторных антител (Powers et al., 1989, Rudenko et al, 2001). Сочетанное применение ИГВ и ЖГВ может позволить прийти к компромиссу по затрате материальных и временных ресурсов при применении пандемической вакцины. В связи с этим в эксперименте было проведено изучение иммуногенности при различных схемах последовательного введения ЖГВ и ИГВ из штамма Лен17/Н5. В качестве положительного контроля использовали сыворотки мышей, иммунизированных в/м субъединичной инактивированной вакциной из вируса А(H5N2) c гидроокисью алюминия производства ». Результаты представлены в таблице 15.

Наиболее высокий уровень СГТ антигемагглютинирующих антител к очищенному НА вируса А(H5N2) наблюдался после сочетанной иммунизации ЖГВ с ревакцинацией ИГВ. СГТ нейтрализующих антител, напротив, были наиболее выраженными (1:80) при вакцинации по сочетанной схеме ИГВ с последующей ревакцинацией ЖГВ. В этом случае также наблюдались существенные приросты локальных IgG (p=0,03) и IgA (p=0,05).

Таблица 15

Иммуногенность ЖГВ и ИГВ подтипа А(H5N2) при введении мышам раздельно и в сочетании

Таким образом, в эксперименте было показано, что двукратная сочетанная иммунизация с использованием ЖГВ и ИГВ позволила повысить СГТ антигемагглютинирующих антител в 10 раз, в то время как применение ИГВ с адьювантом – в 2,5 раза. Использование ИГВ для первичной вакцинации и ЖГВ для ревакцинации позволило добиться не только повышения интенсивности гуморального иммунного ответа, но и сочетанности продукции секреторных IgA и антител в сыворотке крови.

ВЫВОДЫ

1.  Сравнительный анализ нуклеотидных замещений в генах холодоадаптированного штамма А/Москва/21/17/65(H2N2) и его предшественника – варианта А/Москва/21/65(H2N2) показал, что основные изменения, ответственные за проявления холодовой адаптации, локализуются в гене РВ2. Свойства холодовой адаптации и аттенуации, наследуемые реассортантами на основе штамма А/Москва/21/17/65(H2N2), позволяют обосновать его использование не только в качестве холодоадаптированного вакцинного штамма в случае пандемии, вызванной вирусом гриппа подтипа А(Н2N2), но и как потенциальный новый донор аттенуации для получения реассортантных вакцинных штаммов.

2.  Результаты секвенирования донора аттенуации В/СССР/60/69 для сезонной тривалентной ЖГВ подтвердили полученные ранее данные об аттенуации этого донорского штамма и дали возможность модифицировать ОТ-ПЦР рестрикционный метод применительно к генам внутренних и неструктурных белков реассортантных вакцинных штаммов вирусов гриппа В.

3.  Впервые получена уникальная коллекция высокорепродуктивных реассортантов вирусов гриппа А(Н5N2), А(Н7N3) и А(Н9N2), устойчиво проявляющих ts-, ca- и att- фенотип, с использованием стандартного метода генетической реассортации на основе холодоадаптированного донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57(H2N2).

4.  Экспериментально установлено, что ЖГВ подтипа А(H5N2) из реассортантного штамма А/17/утка/Потсдам/86/92 защищает мышей против реинфекции высокопатогенными вирусами А(Н5N1), значительно различающимися как антигенно, так и генетически. Защита от летальности и системного распространения инфекции коррелирует с образованием перекрестно-реагирующих сывороточных и секреторных антител.

5.  В доклинических испытаниях на курах установлена неспособность к репродукции в организме птиц холодоадаптированных вакцинных штаммов А(H5N2) и А(H7N3), что подтверждает безопасность их производства и применения в районах с высокоразвитым сельским хозяйством.

6.  В клиническом изучении показана безвредность и ареактогенность прототипа ЖГВ из реассортантного штамма А/17/утка/Потсдам/86/92(H5N2) для волонтеров. Генетическая стабильность реизолятов вакцинного вируса подтипа является дополнительной гарантией безвредности применения подобных штаммов на людях. Вакцина вызывает образование системных и секреторных антител. Для достижения наибольшего уровня иммунологической эффективности требуется двукратное введение вакцины с интервалом в 21 день.

7.  В клинических испытаниях обосновано применение тривалентной ЖГВ, включающей реассортантные вакцинные штаммы на основе доноров аттенуации А/Ленинград/134/17/57(H2N2) и В/СССР/60/69, в качестве единого препарата для всех групп населения, включая детей от трех лет, взрослое население и лиц пожилого возраста, на основании чего внесены изменения в Фармакопейную Статью на «Вакцину гриппозную аллантоисную интраназальную живую сухую» ФСП 7-04.

8.  Предложена тактика применения ЖГВ в случае пандемии, которая заключается в подготовке и апробации вакцинных кандидатов всех потенциально пандемических подтипов вирусов гриппа. В случае формирования нового пандемического штамма наиболее целесообразной является двукратная иммунизация соответствующей моновалентной ЖГВ, начиная с 1-й волны пандемии с охватом всех возрастных групп населения.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Авторские свидетельства.

1.  , Ларионова Г. И., , Климов вируса гриппа В/60/Иоханнесбург/99/50 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей // Патент № 2 опубл. 10.11.2003.

2.  А., , Александрова вируса гриппа А/17/Калифорния/04/71(Н3N2) // Патент № 2 опубл.27.09.2007.

3.  Rudenko L. G., Desheva J. A., Alexandrova G. I. Influenza virus vaccine // WO 2007/118284 A1, 25.10.2007.

4.  А., , Александрова вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/92(Н5N2) для производства живой и инактивированной гриппозной вакцины // Патент № 2 опубл. 10.03.2008.

Научные обзоры.

1.  , Руденко и перспективы разработки вакцин против пандемически опасных вирусов гриппа птиц // Медицинский академический журнал, 2005.-Т.4.-№ 4.-С.26-35.

Статьи в реферируемых журналах и сборниках научных статей.

1.  , , , , , , Формирование гуморального и секреторного иммунитета у лиц пожилого возраста при различных схемах иммунизации гриппозными вакцинами // Вопросы вирусологии.- 1998.- №1.- Т. – 43. - С. 20-24.

2.  , , , , , , Иммунный ответ лиц пожилого возраста в зависимости от числа ежегодных сезонных иммунизаций живой и инактивированной гриппозными вакцинами // Вопросы вирусологии.- 1998.- Т. 43. - №3. С.130-134.

3.  , , , , , Продукция интерлейкина-2 in vitro и in vivo у пожилых людей, привитых раздельно и сочетанно живой и инактивированной гриппозными вакцинами // Вопросы вирусологии.- 2000.-Т. 45.- №1.- С. 25-29.

4.  , , , , , Пролиферативная активность лимфоцитов пожилых людей in vitro при раздельной и сочетанной иммунизации живой и инактивированной гриппозными вакцинами // Вопросы вирусологии.- 2000.-Т.45- №2.-C.41-45.

5.  Klimov A. I., Kiseleva I. V., Desheva J. A., Alexandrova G. I., Cox N., Rudenko L. G. Live attenuated reassortant influenza vaccine prepared using A/Leningrad/134/17/57(H2N2) donor strain is genetically stable after replication in children 3-6 years of age // Options for the Control of Influenza IV.-A. Osterhaus et al. eds., Exerpta Medica.- 2001.-p. 951-954.

6.  Rudenko L. G., Arden N. H., Grigorieva E., Naychin A., Rekstin A., Klimov A. I., Donina S., Desheva J., Holman R. C., DeGuzmzn A., Cox N., Katz J. M. Immunogenicity and efficacy of Russian live attenuated and US inactivated influenza vaccines used alone and in combination in nursing home residents // Vaccine.-2001.- Vol. 19.-Р. 308-318.

7.  , , , Баранцева Е. А., , Руденко оценка безвредности, иммуногенной активности и профилактической эффективности взрослого и детского вариантов живой гриппозной вакцины у школьников 7-14 лет // Вопросы вирусологии.-2002.-№4.-C.24-27.

8.  , , Николаева Н. И., , Г, , Найхин A. Н., Руденко безвредности, генетической стабильности и иммуногенности живой гриппозной вакцины для взрослых при вакцинации детей до 3х лет // Вопросы вирусологии.- 2002.-№4.-C.21-24

9.  , , , , Руденко ответ на живую гриппозную вакцину // Вестник РАМН.- 2002.- № 12.- С. 24-28.

10.  , , , , Руденко эффект липринола у людей, вакцинированных живой гриппозной вакциной // Медицинский Акадeмический журнал.- 2003.- Т.3.- № 4.- С. 60-65.

11.  , , , Руденко и местный иммунный ответ на гриппозные вакцины у лиц пожилого и молодого вазраста // Вопросы вирусологии.- 2003.-№2.-C.32-36.

12.  , , , , Руденко иммунный ответ на живую холодоадаптированную реассортантную гриппозную вакцину у детей, взрослых и престарелых лиц // Вопросы вирусологии.- 2003.-№ 2.-C. 29-31.

13.  Desheva J., Rudenko L., Alexandrova G., Cox N., Klimov A. Reassortment between avian apathogenic and human attenuated cold-adapted viruses as an approach for preparing influenza pandemic vaccines. Options for the control of Influenza V.– Ed. Y. Kawaoka, Elsevier.- 2004.- P. 724-727.

14.  , , Профилактика гриппа живой гриппозной вакциной у детей // Эпидемиология и вакцинопрофилактика.-2005.-№5 (24).-С.35-37.

15.  Дешева Ю. А., , Лу Х., , Руденко и местный ответ на введение мышам живого холодоадаптированного (ХА) или инактивированного реассортантного штамма подтипа Н5 // Медицинская иммунология. -2005.-Т. 7.-№ 2-3 .-С.258-259.

16.  , , Лу Х., , Катц Дж., Руденко иммунный ответ и защита от высокопатогенныого вируса гриппа А(H5N1) у мышей, иммунизированных холодоадаптированным вирусом гриппа А/Ленинград/134/17/57(H2N2) // Медицинская иммунология.- 2005.- № 5-6.- С. 506-510.

17.  , , Дешева Ю.А., Руденко общих и вирус-специфических IgE у детей и пожилых людей, иммунизированных живой гриппозной вакциной // Аллергология.-2006.-№3.-С. 17-21.

18.  Lu X., Edwards L. E., Desheva J.A., Nguen D., Rekstin A, Stephenson J., Szretter K., Cox N., Rudenko L. G., Klimov A., Katz J. Cross-protective immunity in mice induced by live-attenuated or inactivated vaccines against highly pathogenic influenza A (H5N1) viruses // Vaccine.- 2006.- Vol. 24.- № 44-46.-Р..

19.  Desheva J. A., Lu X. H., Rekstin A. R., Rudenko L. G., Swayne D. E., Cox N. J., Katz J. M., Klimov A. I. Characterization of an influenza A H5N2 reassortant as a candidate for live-attenuated and inactivated vaccines against highly pathogenic H5N1 viruses with pandemic potential // Vaccine.- 2006.-Vol. 24.-№ 47-48.-Р. .

20.  , , , ,
Руденко ростовых характеристик одногенных реассортантов эпидемического вируса А/Ленинград/134/57(H2N2) и его холодоадаптированного мутанта А/Ленинград/134/17/57(H2N2) // Вопросы вирусологии.-2007.-Т.52.-№ 2.-С. 13-15.

21.  , , Климов состава генома реассортантных холодоадаптированных штаммов вируса гриппа В методом рестриктазного анализа // Вопросы вирусологии.-2007.-Т.52.-№3.-с.16-19.

22.  , Лу Х., , Климов свойства реассортантного холодоадаптированного штамма вируса гриппа А(H5N2) при интраназальном введении мышам // Вопросы вирусологии.-2007.- Т.52.-№4.-с.27-30.

23.  Gambaryan A. S., Tuzikov A. B., Pazynina G. V., Desheva J. A., Bovin N. V., Matrosovich M. N., Klimov A. I. 6-sulfo sialyl Lewis X is the common receptor determinant recognized by H5, H6, H7 and H9 influenza viruses of terrestrial poultry // Virol. J.- 2008.- 5:85.-10 p. (http://www. /content/5/1/85).

24.  Desheva J. A., Rudenko L. G., Rekstin A. R., Swayne D. E., Cox N. J., Klimov A. I. Development of candidate H7N3 live attenuated influenza vaccine // Options for the control of influenza VI.- Ed. J. M. Katz., Int. Med. Press.-London, Atlanta.-2008.-P. 591-592.

25.  Rekstin A. R., Desheva J. A., Rudenko L. G. Interference-dominance properties of cold-adaped influenza viruses // Ibid.- P. 522-524.

26.  А., , , Руденко биологических свойств холодоадаптированного реассортантного штамма вируса гриппа подтипа H7N3 // ЖМЭИ.-2008.-№ 6 (в печати).

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах: 1 2 3 4 5 6 7