Безвредность кандидатов в вакцинные штаммы при интраназальном введении мышам. Изучение репродуктивной активности в дыхательных путях мышей показало, что все ХА реассортанты апатогенных птичьих вирусов были аттенуированными для мышей, репродуцируясь более эффективно в носовых ходах, чем в легочной ткани (табл.7).

Таблица 7

Репродуктивная активность реассортантов апатогенных птичьих вирусов и родительских штаммов в дыхательных путях мышей при заражающей дозе

6 lg ЭИД50

Препарат

Характеристика

Выделение вируса на 3-й день п. и.

(lg ЭИД50/мл), n=3

легкие

носовые ходы

Лен 17/Н5

7:1 ХА реассортант

2,1±1,0

3,5±0,0

Н5N2-дт

«дикий» температуроустойчивый

6,3±0,3

1,6±0,2

Лен 17/Н7

6:2 ХА реассортант

≤1,5

3,7±0,3

Н7N3-дт

дикий» температуроустойчивый

6,4±0,2

1,7±0,0

Лен 17/Н9

6:2 ХА реассортант

≤1,5

3,7±0,2

Н9N2-дт

«дикий» температуроустойчивый

4,9±0,5

1,8±0,5

Лен/17

ХА донор аттенуации

2,3±0,5

2,5±0,3

Раствор ФСБ

Контроль

≤1,5

≤0,8

Полученные результаты свидетельствуют, что классическими методами в куриных эмбрионах подготовлены высокорепродуктивные реассортанты вирусов гриппа потенциально пандемических подтипов, проявляющие свойства температурочувствительности, холодовой адаптации и аттенуации, необходимые для вакцинных штаммов ЖГВ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ

РЕАССОРТАНТНОГО ШТАММА А/17/УТКА/ПОТСДАМ/86/92(H5N2).

Основные этапы данного раздела работы были выполнены в Центре по контролю и предупреждению заболеваний США (Атланта, Джорджия).

Антигенная специфичность. Проведенное сравнение полных нуклеотидных последовательностей вируса H5N2-дт «дикого» типа и 7:1 реассортанта соответствующего подтипа выявило отсутствие изменений в процессе реассортации и селективных пассажей. Тем не менее, известно, что вирусы гриппа могут антигенно отличаться даже в случае полной идентичности аминокислотного состава НА, в частности, вследствие различных путей гликозилирования при культивировании в различных системах (Katz et al., 1999, Romanova et al., 2003). В таблице 8 представлены данные изучения антигенных свойств реассортантного штамма Лен 17/Н5 в РТГА с набором иммунных сывороток хорьков.

Таблица 8

Данные РТГА с антисыворотками хорьков

Вирусы

Подтип

Антисыворотки хорьков

Гк/156

Гс/Гк/437

Вн/113

Вн/342

Гк/213

Лен 17/H5

A/Гонконг/156/97 (Гк/156)

H5N1

320

160

640

640

<20

160

A/Гусь/Гонконг/437-4/99 (Гс/Гк/437)

H5N1

640

640

5120

2560

640

1280

A/Гусь/Вьетнам/113/01 (Вн/113)

H5N1

160

40

2560

320

160

80

A/Утка/Вьетнам/342/01 (Вн/342)

H5N1

320

160

320

2560

<20

640

A/Гонконг/213/03 (Гк/213)

H5N1

640

160

10240

2560

2560

640

Лен17/H5

H5N2

160

40

1280

640

<20

640

H5N2-дт

H5N2

160

80

1280

640

<20

640

A/курица/Гонконг/409.1/02

H5N1

160

80

5120

320

640

320

A/курица/Гонконг/31.4/02

H5N1

320

80

320

640

<20

320

A/Гусь/Гонконг/668.1/01

H5N1

160

80

640

640

160

160

Показано, что вакцинный кандидат Лен 17/Н5 являлся идентичным родительскому штамму А(H5N2), а также проявлял более выраженную степень антигенного родства с ВП вирусами А(H5N1), выделенными в Гонконге в 1997 году, по сравнению с вирусами А(H5N1) годов выделения. При этом сыворотка, полученная к самому реассортанту Лен 17/Н5, реагировала в пределах всего 1:2 – 1:4 гомологичного титра как с вирусами 1997 года выделения, так и с более поздними изолятами.

Изучение генетической стабильности реассортантного ХА штамма Лен 17/Н5 после пассажа в носовых ходах хорька. В процессе получения иммунной антисыворотки реассортантный вирус вводили в носовые ходы хорька в дозе 6 lg ЭИД50/мл с последующим выделением реизолятов на 3-й и 6-й день после инокуляции. Носовые смывы пассировали трехкратно в РКЭ. Вакцинный вирус, выделенный на 3-й день после инокуляции, сохранил все значащие мутации в генах внутренних и неструктурных белков, характерные для донора аттенуации Лен/17. На 6-й день после инокуляции вирус не был выделен (Desheva et al, 2005).

Иммуногенность реассортантного штамма Лен 17/Н5 при введении белым мышам. На мышах была изучена возможность использования штамма Лен 17/Н5 в качестве как ЖГВ, так и инактивированной вакцины (ИГВ). Было проведено сравнительное изучение иммуногенности ЖГВ в дозе 107 ЭИД50/мл, вводимой интраназально (и/н) и цельновирионной ИГВ, инактивированной формалином, в дозе 10 мкг/100 мл, вводимой внутримышечно (в/м). Результаты представлены в таблице 9. После однократной и/н иммунизации ЖГВ из штамма Лен 17/Н5 сероконверсии антигемагглютинирующих и нейтрализующих антител в сыворотках крови наблюдались только к гомологичному вирусу подтипа А(H5N2). В качестве ИГВ, парентеральное введение Лен 17/Н5 стимулировало образование сывороточных антител как к гомологичному вирусу A(Н5N2), так и вирусам A(H5N1), выделенным в 1997 г. в Гонконге (А/Гонконг/156/97 и А/Гонконг/483/97).

Таблица 9

Иммуногенность ЖГВ и ИГВ из реассортантного штамма Лен 17/Н5 через 6 недель после введения мышам

Препарат

РТГА (среднегеометрические титры), n=5

РН (средние титры нейтрализующих антител), n=5

H5N2-дт

Гонконг/483

Гонконг/213

H5N2-дт

Гонконг/156

Гонконг/213

ЖГВ (и/н)

8,9

<10

<10

80

<20

<20

ИГВ (в/м)

10,0

7,6

<10

160

80

<20

H5N2-дт (и/н)

10,0

<10

<10

160

80

40

ФСБ(и/н)

<10

<10

<10

<20

<20

<20

Применение ИФА позволило выявить в ответ на введение ЖГВ или ИГВ развитие сероконверсий вирус-специфических IgG и IgA в сыворотках крови к вирусам H5N1: к цельному вирусу A/Гонконг/213/03 и очищенному НА А/Гонконг/156/97 (рис. 3). В группе мышей, иммунизированных ЖГВ, были выявлены специфические IgG и IgA антитела к вирусам А(H5N1) в легких и верхних дыхательных путях (ВДП). Внутримышечное введение ИГВ не стимулировало выработку IgA в легких и ВДП, локальный иммунный ответ в этом случае был представлен в основном IgG и был выражен значительно слабее, чем при интраназальном введении ЖГВ (р<0,001) (рис.3).

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5 6 7