Одним из важных этапов в трансплантации эмбрионов является правильный отбор маток-доноров для получения от них максимального количества эмбрионов. При этом отбор препотентных на гормональную обработку доноров, дающих достаточное количество биологически полноценных эмбрионов, является одним из основных звеньев в технологии трансплантации эмбрионов сельхозживотных. Исходя из этого, в качестве доноров отбирались животные, отличающиеся высокой суперовуляцией, вызываемой различными гормональными препаратами, обладающими фолликулостимулирующей активностью. Были отобраны овцематки каракульской породы разных окрасок и расцветок в количестве 56 гол.

Результаты исследований показали, что из числа доноров, отобранных гормональным препаратом, суперовуляцией реагировало 83,9 %. При этом к числу доноров с полиовуляцией отнесены те, у которых в яичниках обнаружено не менее 4 овуляций. Для дальнейшего изучения было отобрано 47 гол. доноров с высоким уровнем суперовуляторной реакции яичников с целью изучения влияния нарушенного естественного гормонального баланса донора после стимуляции на качество эмбрионов. В результате была установлена неодинаковая реактивность яичников доноров каракульских овец разных окрасок после обработки. Основным критерием оценки эмбриопродуктивности суперовулированных доноров является число вымытых эмбрионов, пригодных для пересадки. Установлено, что среднее число извлеченных биоматериалов в группах доноров маток было почти одинаковым, с небольшими колебаниями. Это, видимо, связано с индивидуальными особенностями каракульских маток-доноров разных внутрипородных типов. Наибольшая эмбриопродуктивность отмечена в группах доноров сур сурхандарьинского, казахского типов и серой окраски, несколько ниже у доноров окраски сур бухарского типа, коричневой и черной окрасок.

Такая же тенденция наблюдается по числу нормальных эмбрионов и неоплодотворенных яйцеклеток. При этом выход эмбрионов от числа извлеченных биоматериалов составил в пределах от 78,9 до 91,8 %, а яйцеклетки – от 7,7 до 21,1 %.

. Отмечено, что высоко реагировавшие на гормональную обработку каракульские матки разных внутрипородных типов по эмбриопродуктивности между собой существенно не отличались. При этом число извлеченных биоматериалов на донора в группах колеблется от 7,29 до 11,70 шт. [14].

Доказана высокая эффективность использования показателей наследуемости в генетических исследованиях и селекции животных. В селекции каракульских овец изучение генетического влияния родителей на потомство позволяет более точно определить генетический прогресс популяции в нужном направлении. Впервые проводился дисперсионный анализ по иерархическому комплексу для оценки генетического влияния баранов и маток-доноров на изменчивость живой массы в потомстве приемной матери-реципиента. Объектом для исследований служили доноры и бараны смушково-мясо-сальной породы окраски сур, а в качестве реципиента использовались овцы каракульской породы черной окраски. Установлено, что генотип истинных родителей в потомстве приемной матери-реципиента наследуется достаточно высоко. Взаимодействие факторов приемной матери на проявление фенотипа ягнят-трансплантатов по живой массе указывает на целесообразность использования в эмбриотрансплантации реципиентов с высокой живой массой. Полученные результаты необходимо учитывать в целенаправленной селекционно-племенной работе [15].

Одним из препятствий широкого внедрения в практику овцеводства метода трансплантации эмбрионов является низкая приживляемость эмбрионов после пересадки их реципиентам.

Известно, что на приживляемость эмбрионов существенно влияют следующие факторы: синхронность охоты реципиентов с донорами; стадия развития и качество эмбрионов до пересадки; время между вымыванием и пересадкой; место пересадки в рог матки; число пересаживаемых эмбрионов.

Исходя из имеющихся источников, приживляемость пересаженных эмбрионов сельскохозяйственных животных в матку реципиента с учетом вышеперечисленных биотехнологических факторов составляет в основном 30-60 %. Иногда встречались случаи приживляемости эмбрионов у овец до 70 %, а КРС – до 90 %. Вероятность такой результативной эмбриопересадки мизерная – из 100 пересадок 10 %. Такие нежелательные результаты трансплантации эмбрионов животных, особенно у овец, существенно снижают рентабельность практического применения данного метода в овцеводстве.

Отсутствие высокоэффективных методов повышения приживляемости эмбрионов генетически ценных особей вынуждает активизировать поиски более совершенных способов и расширить круг факторов, влияющих на выживаемость эмбрионов.

От решения этого важного, в научном и практическом отношении вопроса, зависит судьба одного из перспективных методов биотехнологии – трансплантации эмбрионов, предлагаемого для внедрения в овцеводство.

Главным фактором, ведущим к эмбриосмертности – иммуногенетическая несовместимость между истинными и приемными матерями.

В этом отношении значительный интерес представляет изучение иммуногенетических факторов, позволяющих раскрыть причины ранней смертности эмбрионов при различных сочетаниях гомо - и гетерозиготных родителей по типам трансферринов и является нововведением в технологию трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных.

Проведены исследования по разработке высокоэффективной технологии трансплантации эмбрионов каракульских овец, повышающих их приживляемость. Были отобраны 24 матки-донора и 6 баранов с разными типами трансферринов в сыворотке крови. По мере прихода маток-доноров в охоту после гормональной обработки их осеменяли двукратно с интервалом 8-10 ч соответствующими баранами.

Результаты исследований показывают, что приживляемость пересаженных эмбрионов реципиентам во многом зависит от сходства родителей и приемной матери по типам трансферринов.

Приживляемость эмбрионов, пересаженных в рог матки, в зависимости от сочетания гомозиготных и гетерозиготных по трансферринному локусу истинных родителей и реципиентов колебалась в пределах от 0 до 85,7 %. При этом у родителей, имевших одинаковую гомозиготность по типам трансферринов, уровень приживляемости эмбрионов был очень высоким (85,7 %). Безрезультативность эмбриопересадок отмечена, когда родители имели разную гомозиготность по типам трансферринов.

В среднем приживляемость эмбрионов после пересадки их в рог матки реципиентам в зависимости от сочетания истинных и приемных родителей по типам трансферринов составила 52,8 %.

Представленные материалы указывают на возможность повышения жизнеспособности эмбрионов в организме реципиента на статистически достоверную величину (до 33 %) путем сочетания их родителей и реципиентов по типам трансферринов при пересадке, что является новым научным подходом в развитии биотехнологии трансплантации эмбрионов. Полученные в ходе эксперимента результаты, возможно, являются гарантом в ближайшем будущем крупномасштабного внедрения метода трансплантации эмбрионов в практику животноводства
.

Разработан новый способ повышения приживляемости эмбрионов при их трансплантации, обеспечивающий получение максимального количества животных-трансплантатов, отличающийся тем, что до пересадки эмбрионов допольнительно определяют типы трансферринов в сыворотке крови у животных, используемых в трансплантации эмбрионов, и отбирают в качестве истинных и приемных родителей только одинаково гомозиготных животных по типам трансферринов.

Данный способ не имеет аналогов в практике трансплантации эмбрионов и предлагается впервые.

Разработанный иммуногенетический критерий прогноза приживляемости эмбрионов после пересадки считаем доступным в условиях практического использования в период трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных, особенно при сохранении и ускоренном размножении редких и исчезающих генотипов их генофонда.

Внедрение предлагаемого способа в технологию трансплантации обеспечивает стабильное получение максимального количества животных-трансплантатов и высокой прибыли, по сравнению с известными методами при равноценных финансовых вложениях, гарантирует сохранение и ускоряет процесс воспроизводства особо ценных моноплодных животных.

Предложенный способ, по сравнению с ранее известными, обладает следующими преимуществами: повышает уровень приживляемости пересаженных эмбрионов в 1,5 раза; позволяет создать банк гомозиготных эмбрионов по типам трансферринов; расширяет ассортимент генетических материалов для селекции; снижает финансовые и материальные затраты на получение особей-трансплантатов в 3 раза; способствует эффективному использованию методов трансплантации эмбрионов в практике овцеводства, направленных на сохранение и ускоренное размножение исчезающих и редких пород животных [16].

Донора выбирают из стада с относительно высоким уровнем продуктивности, характерной для той или иной породы. Должны быть известны происхождение и группа крови животного, подтвержденные соответствующими документами. В этой категории племенных животных требования для их оценки и отбор должны быть очень высокими.

2.2. Отбор производителей

Для осеменения коров и овец – доноров используют сперму выдающихся быков и баранов-производителей, проверенных по качеству потомства и признанных улучшателями по селекционированным признакам. Подбор производителей и коров, овец-доноров ведут по заказному плану спаривания в соответствии с селекционной программой, утвержденной племенной службой. Для использования и трансплантации пригодны лишь те производители, которые имеют положительную сочетаемость при спаривании с высокопродуктивными животными. Для определения сочетаемости используют материалы оценки производителей по качеству потомства. Отобранные производители не должны иметь хромосомных аномалий, а их потомство – наследственно обусловленных экстерьерно-конституционных недостатков.

Подбор быков-производителей к коровам-донорам – строго индивидуален с учетом получения генеалогически разобщенных групп быков и их ротаций. Отдают предпочтение улучшателям по удою, содержанию в молоке белка и жира, а также экстерьеру и конституции дочерей. Учитывают степень проявления признаков у дочерей, обусловливающих технологичность.

При осеменении коров-доноров у редких и исчезающих пород используют сперму быков, принадлежащих к генетически разобщенным группам, в соответствии с задачами сохранения генофонда и использования его в перспективе.

В селекционной работе, направленной на повышение племенных и продуктивных качеств каракульских овец, представляет большое значение использование лучших производителей по результатам их оценки на разных этапах отбора и получение более препотентных животных, стойко передающих потомству свои наследственные качества. Чем тщательнее проверен и изучен генотип баранов, тем точнее можно осуществлять подбор на тех матках-донорах, с которыми они дали больше потомство – трансплантатов родительского типа при гомогенном подборе по ведущим селекционируемым признакам. Это позволяет ускорить процесс совершенствования популяции по племенным и продуктивным качествам.

Главная задача метода трансплантации эмбрионов – получение максимального количества ценных в генетическом отношении животных-трансплантатов от высокопродуктивных матерей и отцов, проверенных по качеству потомства. При пересадке эмбрионов не всегда учитывается индивидуальная продуктивность производителей и маток-доноров в комплексе, хотя первой информацией о предварительной племенной ценности у будущих трансплантатов служат продуктивные и племенные качества отбираемых животных в качестве родителей эмбрионов.

Изучено качество потомства баранов, отобранных для использования в трансплантации эмбрионов каракульских овец окраски сур казахского внутрипородного типа бронзовой расцветки.

Учитывая, что генотип любого животного, в т. ч. производителя, используемых в трансплантации эмбрионов, формируется из наследственных задатков матери и отца, были отобраны 9 баранов, полученных от баранов-улучшателей каракульских овец окраски сур бронзовой расцветки.

Одним из основных показателей при отборе баранов для трансплантации эмбрионов после производственных испытаний является выход ягнят на 100 маток. Между баранами при использовании их в 1,5- и 2,5-летнем возрасте существенных различий по выходу ягнят не установлено. Как показали полученные результаты, бараны, отобранные для использования в трансплантации эмбрионов, по общему качеству потомства не имеют существенных различий по его разнообразию, т. е. обладают высокой препотентностью по ведущим селекционируемым признакам [17].

2.3. Отбор реципиентов

Эффективность трансплантации эмбрионов в значительной степени обусловлена качеством используемых реципиентов. Реципиент – это телка или корова, овца, по племенной ценности ниже чем донор, в организме которой развиваются эмбрионы до рождения приплода.

Реципиентов отбирают из числа молодых коров и телок случного возраста, не представляющих племенной ценности, из расчета 3 -5 гол. на донора. Они должны быть клинически здоровыми. Возраст коров не должен превышать 4 лет, отелы которых ежегодно проходили без осложнений. До поступления на эмбриопересадку у них должна проявиться хорошо выраженная охота. Коровы-реципиенты могут быть использованы для пересадки не ранее, чем через 80 дней после отела.

Телки-реципиенты должны иметь минимальный возраст – 18 мес., живая масса составлять 2/3 массы взрослого животного, средней упитанности, Реципиенты должны иметь нормальную половую цикличность, быть свободными от внешних и внутренних паразитов и иметь отрицательные результаты исследований на туберкулез, бруцеллез, вибриоз, лейкоз. Не допускаются животные с заболеваниями родовых путей.

Нельзя использовать в качестве реципиентов животных мелких пород для трансплантации эмбрионов от пород более крупных по массе. При работе в условиях нехватки реципиентов допускается двух и даже трехкратное использование животных для пересадки эмбрионов.

2.4.Подготовка доноров и реципиентов

Основное условие, определяющее нормальные воспроизводительные функции и получение хорошо развитого приплода, - полноценное сбалансированное кормление с учетом физиологического состояния и продуктивности животных. Особенно важно обеспечить кормление высокопродуктивных коров-доноров в период запуска и в первые 3-4 мес. после отела, поскольку эти периоды совпадают с максимальным увеличением массы плода и наивысшей молочной продуктивностью, на что расходуется большое количество питательных веществ. Низкий уровень кормления, несбалансированность рационов по общей питательности и жизненно важным элементам ведут к нарушению обмена веществ, воспроизводительных функций, снижению качества эмбрионов.

С другой стороны, длительное использование коров и телок в целях трансплантации может привести к ожирению, что резко снижает эффективность производства эмбрионов.

Условия кормления и содержания для реципиентов то же, что и для доноров.

Доноров и реципиентов следует содержать в чистых, сухих, хорошо вентилируемых помещениях при температуре и влажности воздуха, отвечающих зоогигиеническим требованиям. Животным необходим ежедневный моцион, в летнее время выпас на пастбище. В помещениях и на территории содержания скота должна соблюдаться санитарная культура и основные ветеринарные требования к животноводческим предприятиям закрытого типа.

Умеренное кормление в сочетании с обязательным ежедневным моционом является залогом длительного и эффективного срока эксплуатации доноров и высокой результативности метода трансплантации эмбрионов.

3. ТЕХНОЛОГИЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ ЭМБРИОНОВ

Современная технология трансплантации эмбрионов состоит из множества этапов, каждый из которых оказывает значительное влияние на эффективность всего метода в целом и требует строгого соблюдения технологической дисциплины. В работах по трансплантации эмбрионов широко используются такие операции, как стимуляция суперовуляции у доноров, синхронизация половых циклов доноров и реципиентов, нехирургическое извлечение, поиск и оценка качества эмбрионов, культивирование, замораживание и хранение эмбрионов в жидком азоте, разделение эмбрионов, хирургическая и нехирургическая пересадка эмбрионов.

3.1. Стимуляция суперовуляции у доноров

Привлекательность метода трансплантации эмбрионов для селекционеров заключается в возможности увеличить уровень воспроизводства ценных коров путем переноса эмбрионов от этих коров матерям-заменителям. Яичники коров обычно продуцируют одну яйцеклетку в 21-дневный срок, и в норме коровы приносят одного теленка в год. Один эмбрион может быть извлечен и пересажен другим коровам через 6-8 дней после осеменения донора в естественную течку, но это является экономически нецелесообразным, поскольку стоимость проведения таких работ высокая. Следовательно, очень важным аспектом технологии трансплантации эмбрионов является использование гормонов для индуцирования множественной овуляции в яичниках коров-доноров (называемой суперовуляцией). Таким образом, метод вызывания суперовуляции является краеугольным камнем в технологии трансплантации эмбрионов, но из-за высокой вариабельности реагирования доноров на вводимые гонадотропные гормоны он остается самой большой проблемой.

Проведены многочисленные исследования по использованию различных гонадотропинов, гипофизарных и плацентарных гормонов для вызывания суперовуляции у коров и телок-доноров. При этом основной целью было определение влияния различных гормонов, их сочетаний, установление оптимальных доз гормональных препаратов, которые за несколько дней до предполагаемой охоты вызвали бы стимуляцию роста и созревания 10-20 и более фолликулов.

Проблемным вопросом в сохранении и размножении генофонда каракульских овец является искусственное вызывание множественной овуляции, которая считается важным этапом в технологии трансплантации эмбрионов. Для этого в настоящее время разные исследователи рекомендуют применять препараты с различной очисткой (ФСГ, ГСЖК, СЖК и др.).

Как отмечают , , [18], в исследованиях по трансплантации эмбрионов для гормональной стимуляции суперовуляции более эффективным является использование препарата ФСГ, способствующего стимуляции более высокой степени овуляции и получению большего числа яйцеклеток и зародышей. Так, при обработке препаратом ФСГ получено больше яйцеклеток и зародышей на одного донора (в среднем - 8,1 овуляций на донора), нежели препаратом СЖК (в среднем - 4,6 овуляций на донора).

Результаты исследований показывают, что овцематки на обработку одина­ковой дозой одного и того же гонадотропина реагируют сугубо индивидуально. Среди овец, обработанных одной и той же дозой одного и того же гонадотропина, наблюдается большая изменчивость по степени их реакции суперовуляцией.

Проведены специальные исследования по совершенствованию методов гормональной стимуляции доноров препаратом СЖК (сыворотка жеребых кобыл) отечественного производства и повышению его конкурентоспособности. Материалом для исследований служили сыворотки крови кобыл, взятые на 60, 70 и 80 дни жеребости и овцематки-доноры на 2 день полового цикла. Для гормональной индукции суперовуляции у доноров было сформировано 4 группы маток. В 3-х группах проведена однодневная гормональная обработка. В 4 группе доноров проведена 4-дневная гормональная обработка по принципу сочетания соотношений ФСГ/ЛГ «СЖК-донор». В работе доказана необходимость учета соотношений ФСГ:ЛГ (фолликулостимулирующий гормон, лютеинизирующий гормон) в крови донора после прихода в охоту и в препарате СЖК при вызывании множественной овуляции, а также высокая эффективность 4-дневной гормональной обработки доноров [19].

Алибаевым, О. Бекетауовым и др. [20] способ гормона­льной обработки доноров каракульских овец для трансплантации эмбрионов, основанный на оптимизации дозы СЖК на 1 кг живой массы донора 25-26 ME, увеличивает овуляцию в среднем на одного донора до 3,8 шт., реакцию суперовуляции — на 25,0 % и позволяет получить на 16,1 % больше нормальных жизнеспособных эмбрионов по сравнению с известным способом.

Актуальными проблемами каракулеводства Казахстана является резкое увеличение поголовья и улучшение качества смушек Проведены исследования по трансплантации эмбрионов каракульских овец. В качестве доноров использовались каракульские овцематки, в качестве реципиентов – овцематки казахской тонкорунной, казахской полутонкорунной и едилбаевской пород. Овцематок-доноров обрабатывали гормональными препаратами СЖК и ФСГ. Число овуляций в обоих яичниках при обработке СЖК в среднем 7,4; при обработке ФСГ – 12,7. Извлечено яйцеклеток и зародышей при обработке СЖК 6,1 (82,4 %), при обработке ФСГ – 10,3 (81,1 %) в среднем на одного донора. Операцию по вымыванию зародышей из репродуктивных органов овцематок доноров производили по истечении 48-72 ч от момента выявления их в стадии половой охоты. Эмбрионы пересаживали овцематкам-реципиентам хирургическим методом. Приживляемость составила в среднем 63 %. Применение биотехнологического метода трансплантации эмбрионов позволит значительно ускорить селекционный процесс в каракулеводстве [21].

Учитывая способности периодически повторяющейся половой охоты у овец, проведены испытательные опыты по использованию особо редких генотипов каракульских овец два раза в течение случного периода в качестве доноров эмбрионов. Цель данного эксперимента – определение продуктивных дней полового цикла доноров после гормональной обработки, позволяющие повысить эффективность проведения трансплантации эмбрионов и максимально сократить безрезультативные операции. С этой целью отобраны 13 голов каракульских маток разных окрасок и использовали их в качестве доноров два раза в течение одного случного сезона. Изучены изменчивость длительности полового цикла доноров, периодически двукратно обработанных гормональным препаратом СЖК (сыворотка жеребых кобыл). Установлено, что после первой обработки и извлечения их эмбрионов, вторично пришли в охоту 11 голов или 84,6 % доноров. Это свидетельствует о возможности применения в каракулеводстве двукратного гормонального стимулирования полиовуляции в течение года. Следовательно, оценка и отбор особо редких генотипов в качестве доноров по длительности полового цикла, для двукратной гормональной обработки в течение случного сезона является как бы страховочным приемом, предотвращающим негативные случаи исчезновения ассортивности популяции. Тем самым позволяет сохранить основателя пул генов в генофондом популяциях цветных каракульских овец [22].

и др. [23] отмечают, что трансплантация эмбрионов – новый биотехнологический прием в селекции сельскохозяйственных животных, основной эффект которого состоит в увеличении количества потомков материнской линии. Важным этапом трансплантации эмбрионов является гормональное вызывание полиовуляции у доноров. Изучены влияние вызывания суперовуляции одних и тех же доноров с перерывом в один год на овуляцию. Отмечено, что из 18 обработанных в первый год доноров реагировало суперовуляцией 88,9 % со средним уровнем овуляции 8,05 % на каждого положительного донора. После второй гормональной обработки этих же доноров через год суперовуляторный ответ наблюдается у 80,0 % животных при среднем числе овуляций 7,73 % на каждого обработанного донора. Таким образом, высокая степень повторяемости гормональных статусов доноров при обработках один раз в год свидетельствует о том, что от одних и тех же высокоценных особей можно получить дополнительные овуляции путем вызывания суперовуляции у овец с перерывом в один год без какого-либо значительного снижения овуляторной реакции. Именно этот способ будет единственным гарантом, препятствующим исчезновению и способствующим сохранению особо редких генотипов каракульских овец.

Важным этапом в технологии трансплантации эмбрионов является суперовуляция животных–доноров, без которой нет смысла внедрения этого метода в практику воспроизводства сельскохозяйственных животных. Для выявления различий в содержании ФСГ и ЛГ (фолликулостимулирующие гормоны, лютеинизирующие гормоны) в крови донора каракульских овец разных окрасок и внутрипородных типов исследовали кровь у 42 овцематок после прихода в охоту. Установлено, что все отобранные доноры для трансплантации эмбрионов не имеют существенных различий по содержанию гормонов в крови в зависимости от окрасок и расцветок. Концентрация ФСГ в плазме крови после прихода в охоту находится в пределах от 5,44 до 6,61 Мед/л, а ЛГ – соответственно 1,2-2,4 Мед/л. Результаты показывают, что среди 42 голов доноров частота встречаемости соотношения ФСГ/ЛГ в пределах 1:1 составила 28,6 %, а содержание фолликулостимулирующего гормона в крови у 17 доноров находилось на среднем (2:1) и у 13 – на высоком (3:1) уровне, т. е. 40,4 и 31,0 %. Отмечено, что у каждого донора гормональный фон индивидуален. Эту особенность можно эффективно использовать при индукции суперовуляции у каракульских овец редких и исчезающих окрасок [24].

О. Бекетауов, Н. Алибаев [25], О. Бекектауов, Н. Алибаев, Н. Адилбеков [26], Н. Әлібаев, О. Бекетауов, Н. Адилбеков [27], Н. Адилбеков [28] предлагают 4-дневную схему индукции суперовуляции с учетом соотношения ФСГ/ЛГ в инъецируемых препаратах СЖК и в крови донора. По их данным новая схема обработки обеспечивает 100 % суперовуляцию маток-доноров каракульских овец.

Существует множество различных схем индуцирования суперовуляции у коров-доноров, но наиболее распространенными являются те, по которым введение гонадотропинов начинают на 8-10-й день полового цикла.

На суперовуляцию и выход качественных эмбрионов влияют такие факторы, как применяемые гормональные препараты и схемы их введения, стадия лактации, сезон года, кратность использования доноров, порода, хозяйственные условия, живая масса, состояние здоровья, уровень и качество кормления и т. д.

Отмечено, что недокорм коров-доноров достоверно уменьшает реакцию яичников на введение гормонов. Для активизации суперовуляции и получения биологически полноценных эмбрионов необходимо обеспечить полноценное кормление доноров, сбалансированное не только по основным питательным веществам, но особенно по аминокислотам и микроэлементам.

Тщательное соблюдение технологии подготовки животных-доноров с учетом вышеперечисленных факторов обеспечивает высокую эффективность трансплантации эмбрионов.

3.2. Синхронизация охоты у доноров и реципиентов

Факторами, лимитирующими успешное применение метода трансплантации в животноводстве, является все еще невысокий уровень знаний о суперовуляции, выход нормальных эмбрионов и их приживляемости. Для успешного приживления эмбрионов при пересадке необходима точная синхронизация половых циклов у доноров и реципиентов. Соблюдение этих условий на практике достигается содержанием значительного числа реципиентов, чтобы в любой день можно было подбирать их донорам, синхронных по половым циклам. Значительно упростить программу эмбриотрансплантации можно путем синхронизации охоты у доноров и реципиентов.

В основном применяют 2 метода синхронизации половой охоты у животных. Первый основан на торможении половой функции яичников и после прекращения применения препарата – усилении роста и созревания фолликулов одновременно у всех обработанных животных. Для этого в организм животных вводят прогестерон или его синтетические аналоги.

Другим более распространенным методом синхронизации является метод использования простагландина F2d или его синтетических аналогов (эстрофан, энзапрост, мотализ, прозельвин и др.). Их использование основано на рассасывания желтого тела и последующего роста и созревания фолликулов. При однократной инъекции простагландина приход животных в охоту не превышает 65 %, что, по-видимому, связано со стадией развития желтых тел, в период которой простагландин не оказывает лютеолитического действия.

В связи со значительной вариабельностью результатов при использовании простагландина используют комбинированную схему обработки животных доноров и реципиентов. В начале без учета форм полового цикла всех отобранных животных обрабатывают прогестероном и затем вводят простагландин.

Следует иметь в виду, что синхронизация охоты донора и реципиента должна проходить с учетом стадии развития эмбрионов, так как разница в их развитии, даже после извлечения день в день, может достигать 1-2 сут., что объясняется неодновременной овуляцией клеток.

Как правило день в день на одного донора готовят 5-6 синхронизированных реципиентов.

3.3. Осеменение животных-доноров

Результаты суперовуляции определяются эффективным осеменением животных-доноров. Проблема оплодотворения яйцеклеток и получения биологически полноценных эмбрионов все еще остается открытой.

Для определения эффективности осеменения животных-доноров используют как свежую, так и замороженную сперму. Эффективность осеменения доноров свежей спермой выше по сравнению с осеменением глубокозамороженной. Это различие объясняется главным образом тем, что сперматозоиды, не подвергавшиеся охлаждению, сохраняют всю активность в половых путях животных более длительное время, чем после оттаивания. Однако учитывая большие преимущества осеменения коров глубокозамороженной спермой оцененных быков-производителей, в практике используют именно такую сперму.

При осеменении доноров применяют цервикальный метод введения спермы, используя один из трех способов ее введения в шейку матки: ректо-цервикальный, моно-цервикальный и визо-цервикальный. Осеменение наиболее предпочтительно производить ректо-цервикальным способом, позволяющим контролировать состояние половых органов коров.

Искусственное осеменение предотвращает распространение целого ряда заболеваний. Уровень оплодотворения после осеменения несуперовулирующих животных глубокозмороженной спермой составляет 85-95 % и только 60-80 % яйцеклеток, извлекаемых из суперовулировавших животных-доноров, является оплодотворенным.

Осеменение доноров производят 3 раза двойной дозой глубокозамороженно-оттаянной спермой с интервалом 10-12 ч, точно фиксируя при этом время прихода в охоту. Замороженную сперму используют после оттаивания при подвижности спермиев не менее 4 баллов. В дозе спермы для осеменения должно быть не менее 50 млн. подвижных спермиев.

В случае скрытой охоты или невозможности установить точное время начала охоты у донора осеменение проводят 56-82 ч. после инъекции простагландина.

День, в который проводится искусственное осеменение животных-донора, считается датой оплодотворения. С этого дня, который в биотехнологии трансплантации животных обозначается нулем, начинается отчет развития эмбрионов до их извлечения.

В овцеводстве искусственное осеменение замороженной спермой используется не так широко, как в молочном скотоводстве. Замораживание и оттаивание семени вызывает ультраструктурные, биохимические и функциональные изменения и повреждения у значительного количества сперматозоидов. Эти изменения сопровождаются снижением подвижности и жизнеспособности семени в половом тракте самки, а также ухудшением оплодотворяемости после цервикального осеменения. Наиболее эффективный метод повышения оплодотворояемости – это увеличение глубины введения замороженно-оттаянной спермы в цервикальный канал. Недавно разработанный трансцервикальный метод позволяет выполнять глубокое цервикальное и даже маточное осеменение. Однако анатомия шейки матки овцы такова, что метод трансцервикального внутриматочного осеменения не внедрен в широких масштабах. Поэтому для внутриматочного осеменения используются лапароскопия, лапаротомия или специальное оборудование и методы. В настоящее время надежные и приемлемые результаты получают при использовании лапароскопического внутриматочного осеменения. Этот метод осеменения овец позволил использовать замороженную сперму, несмотря на проблемы с жизнеспособностью семени, вызванные криоконсервацией, однако крупномасштабное его использование часто ограничивается высокой стоимостью оборудования материалов, а также необходимостью высокого профессионального мастерства оператора. Большинство простых фермеров и животноводов не имеют оборудования и навыков, необходимых для выполнения внутриматочного осеменения овец. Экономические и географические проблемы также препятствуют широкому использованию этого метода. Именно поэтому важно повысить качество и оплодотворяющую способность замороженно-оттаянного семени, ориентируясь на разработку эффективных синтетических сред для криоконсервации семени и совершенствования методов искусственного осеменения. [29, 30].

Проведена исследовательская работа по получению помесей первого поколения от использования замороженной спермы от импортных производителей. В эксперименте оплодотворяемость у овец со спонтанной охотой, осемененных внутриматочно и цервикально замороженным семенем, была примерно одинаковой и составила 41,6 % (74/178) и 39,8 % (197/495) соответственно. Проводили выборку маток в охоте один раз в сутки рано утром и внутриматочно осеменяли 20-25 голов в течение дня. Возможно, что двукратная выборка маток в охоте (утром и вечером) и их внутриматочное осеменение через 8-12 часов после выборки повысят результативность внутриматочного осеменения. Отмечено, что при внутриматочном осеменении затраты семени были в 3 раза меньше, чем при цервикальном осеменении (0,125 и 0,4 мл соответственно). Такая экономия семени может быть очень полезна для рационального и эффективного использования дорогой импортной спермы, стоимость которой составляет от 20 до 100 долларов за 1 дозу объемом 0,25 мл, или для использования замороженного семени от выдающихся отечественных производителей [31].

Определялась молочность маток казахской тонкорунной породы, осемененных замороженно-оттаянным семенем баранов пород рамбулье и полипей. В качестве контроля служили матки исходной группы, осемененные семенем баранов казахской тонкорунной породы. Молочность маток устанавливалась путем взвешивания ягнят в 20-дневном возрасте и умножением полученного прироста массы тела на коэффициент 5. Молочность маток, осемененных семенем баранов породы рамбулье, составила с одинцовыми ягнятами – 21,5 кг за 20 дней, или 1,075 кг в сутки, превысив молочность казахских тонкорунных маток (контрольная группа) на 2,9 %; с двойнями – соответственно 31 и 1,550 кг. Молочность маток группы полипей х Кт составила: с одинцами – 21 кг, с двойнями – 34 кг, соответственно среднесуточная молочность была равна 1,050 и 1,700 кг. Результаты исследования показали, что молочность маток казахской тонкорунной породы в оптимальных условиях кормления и содержания характеризуется достаточно хорошими показателями [32].

В работе С. Тулегенова [33] представлены результаты осеменения овец глубокозамороженным семенем. Установлено, что оплодотворяемость от замороженного семени в значительной степени зависит от состояния и подготовленности маток и баранов-производителей к случному сезону. Так же отмечено о значительном повышении плодовитости и других хозяйственно-полезных признаков маток с помощью использования в скрещивании баранов многоплодных пород. Осеменение овец глубокозамороженным семенем высокопродуктивных баранов, позволяет шире использовать ценных производителей независимо от сезона года, расстояний и различий в климатических условиях, а метод глубокого замораживания семени дает возможность накопить банк запасов спермы от выдающихся баранов, а также использовать их для радикального ускорения селекционного процесса в овцеводстве. Опыты показали, что оплодотворяемость от замороженного семени в значительной степени зависит от состояния и подготовленности маток и баранов-производителей к случному сезону. Так, например, от 318 цигайских маток, осемененных замороженным семенем баранов тексель (опытная группа), объягнились в срок от первого осеменения 186 или 58,5 %. В контрольной группе – 210 маток, осемененных замороженным семенем цигайских баранов, объягнилось 106 или 50,5 % и от свежего семени – 95,9 %.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 5