Малярия тест

Каталожный номер: 35001 Фасовка: 20 тестов/упаковка

Справка

Малярия – одно из наиболее распространённых инфекционных заболеваний в мире. Смертность от малярии оценивается от 1 до 2 миллиона человек в год, при этом практически все летальные исходы связаны с разновидностью малярии, вызываемой Plasmodium falciparum (1). В группу риска по малярии входит около 40% населения Земли; ежегодно регистрируется от 300 до 500 миллионов случаев заболевания, из которых около 80% приходится на тропическую Африку, где в сельской местности от малярии умирает каждый двадцатый ребёнок в возрасте до 5 лет. Существует много различных методов диагностики малярии, включая окраску тонких мазков крови по Гимзе (2), флуоресцентную микроскопию с использованием акридинового оранжевого (3) или бензотиокарбоксипурина (4) и ДНК-тест (5), однако все эти методы требуют больших затрат труда и времени, дорогостоящего оборудования и материалов и высокой квалификации лабораторного персонала. Недавно было обнаружено, что специфический белок, названный HRP-II («белок, богатый гистидином»), может служить индикатором для диагностики малярии. HRP-II – белок, синтезируемый паразитом Plasmodium falciparum после инфицирования им эритроцитов в течение внутриклеточного развития паразита (6, 7).

Принцип определения

Качественный иммунохроматографический экспресс-тест для определения белка HRP-II в лизированных эритроцитах цельной крови. В методе применяется особая комбинация конъюгата мышиных моноклональных антител к HRP-II с красителем и иммобилизованных в тестовой зоне кассеты поликлональных мышиных антител к этому же белку, что позволяет избирательно идентифицировать присутствующий в цельной крови HRP-II с высокой степенью чувствительности. При продвижении тестируемой пробы по адсорбентному слою тестовой кассеты конъюгат антител с красителем соединяется с HRP-II, образуя комплекс антиген–антитело. Этот комплекс затем связывается с иммобилизованными в тестовой зоне антителам к HRP-II и образует пурпурно-розовую полосу в случае присутствия HRP-II в пробе. В отсутствие HRP-II в тестовой области полосы не образуется. Продолжая продвигаться по слою адсорбента, реакционная смесь достигает контрольной области (C), где несвязанный конъюгат соединяется с контрольными реагентами, образуя пурпурно-розовую полосу, подтверждающую качественность применяемых в тесте реагентов. Тест пригоден как для визуального считывания, так и для качественного считывания результатов на иммунохроматографическом экспресс-анализаторе «Easy Reader» (VEDALAB).

Состав

Тестовые кассеты 20

Одноразовые пластмассовые пипетки 20

Гемолизирующий раствор во флаконе-капельнице, 5 мл 1

Содержит буфер, детергент и азид натрия (менее 0,1%).

Инструкция 1

Стабильность и хранение

1. Хранить при температуре от 4 до 30°C в герметичной фабричной упаковке.

2. Не замораживать!

3. Тест стабилен до истечения срока хранения, указанного на этикетке.

Меры предосторожности

Данный тест предназначен только для диагностики in vitro и профессионального применения.

При работе с пробами пользоваться защитной одеждой и одноразовыми перчатками.

Не принимать пищу, не пить и не курить в помещении, где выполняется работа с пробами.

При взятии и тестировании проб не прикасаться руками к слизистой оболочке глаз и носа.

Внимательно прочитать инструкцию перед проведением теста.

Не использовать тестовую кассету, если её защитная упаковка повреждена.

Не использовать тестовую кассету с истекшим сроком хранения.

Обезвреживание отходов

Все пробы следует считать потенциально инфекционными. После завершения процедуры тестирования утилизировать пробы следует с осторожностью и только после стерилизации в автоклаве или обработки 0,5–1% раствором гипохлорита натрия не менее 1 часа.

Подготовка реагента

Все реагенты готовы к использованию.

Исследуемые образцы

Пробы цельной крови с антикоагулянтом.

Взятие и подготовка проб

Взятие крови осуществляется с помощью стандартной лабораторной процедуры. В случае взятия венозной крови следует добавить антикоагулянт (ЭДТА, гепарин и т. д.).

Тестировать пробы цельной крови следует немедленно после взятия.

Для выполнения теста в течение 48 часов после взятия крови пробы следует хранить в холодильнике (при 2 – 8°C) с добавлением антикоагулянта.

Процедура тестирования

1. Перед тестированием довести все пробы, тестовые кассеты и гемолизирующий раствор до комнатной температуры.

2. Извлечь тестовую кассету из защитной упаковки, оторвав край упаковки по надрезу.

3. Пометить тестовую кассету фамилией или кодовым номером пациента.

4. Набрать пробу цельной крови в пипетку-капельницу и, держа её вертикально, внести 1 каплю (25 мкл) пробы в лунку для проб тестовой кассеты. Подождать, пока образец полностью впитается.

5. Внести по капле 5-6 полных капель разбавимкл) в лунку для проб тестовой кассеты, давая впитываться предыдущей капле.

6. Наблюдать результаты теста через 15 минут после внесения пробы визуально или на приборе «Easy Reader».

Интерпретация результатов

Отрицательный: Появляется только одна цветная полоса в контрольной зоне (C). Проба не содержит белка HRP-II.

Положительный: Кроме цветной полосы в контрольном окне, появляется также чётко различимая полоса в тестовой зоне (Т). Проба содержит белок HRP-II.

Неопределённый: Если в контрольной зоне не появилось чёткой цветной полосы, тест считается не прошедшим контроль качества. Следует повторить его, взяв новую тестовую кассету.

Характеристики теста

В рамках испытаний в Африке было задействовано 742 пробы крови, у которых были предварительно исследованы мазки (этот метод был выбран как эталонный). Пробы крови представляли собой капиллярную кровь из пальца, взятую у пациентов с подозрением на малярию. Тонкие и толстые мазки крови окрашивались 2% раствором красителя Гимзе и исследовались на присутствие малярийных паразитов под микроскопом при 1000-кратном увеличении. Исследование выполнялось квалифицированным специалистом в области малярийной микроскопии. 739 из 742 исследованных проб дали поддающиеся интерпретации результаты и считались прошедшими контроль качества. Результаты сравнения тестов приведены в Таблице 1.

Таблица 1. Сравнение результатов тестов

Из таблицы видно, что чувствительность данного теста в сравнении с тестом на мазках, являющимся эталонным тестом для определения Plasmodium falciparum, составляет 89,5%, а специфичность – 93%. Результаты сравнения показывают, что тест обладает очень хорошей для экспресс-тестов достоверностью и может использоваться для определения Plasmodium falciparum.

Ограничения метода

1. Тест предназначен только для определения антигена HRP-II в пробах крови.

2. Тест определяет только HRP-II, продуцируемый Plasmodium falciparum. HRP-II, продуцируемый Plasmodium vivax, не будет определяться данным тестом.

3. Как и для любой диагностической процедуры, окончательный диагноз на основании полученных при тестировании данных должен ставиться врачом только с учётом результатов других клинических методов.

4. Положительный результат не исключает присутствия в пробе других патогенов.

5. Некоторые пробы сыворотки с высокими концентрациями ревматоидного фактора могут дать неспецифический ложный положительный результат при тестировании данным тестом. При тестировании следует учесть эту возможность.

6. При разработке теста преследовалась цель исключить возможное влияние человеческих антител к мышиному IgG (HAMA). Тем не менее, при высоком уровне HAMA в пробе возможен ложный положительный результат.

Литература

1. Gerald S. Murphy & Edward C. Oldfield, (1996) Falciparum Malaria. Infectious Disease Clinics of North America. 10, 747-775.

2. Lanar DE, Mc Laughlin GL, Wirth DF, et al, «Comparison of Thick Films, In Vitro Culture and DNA Hybridization Probes for Detecting Plasmodium falciparum Malaria,» Am J Trop Med Hyg, 1989, 40(1):3-6.

3. Rickman LS, Long GW, Oberst R, et al, «Rapid Diagnosis of Malaria by Acridine Orange Staining of Centrifuged Parasites», Lancet, 1989, 1(8629):68-71.

4. Makler MT, Ries LK, Ries J, et al, «Detection of Plasmodium falciparum Infection with the Fluorescent Dye, Benzothiocarboxypurine,» Am J Trop Med Hyg, 1991, 44(1):11-6.

5. Infection in Human Patients: a comparison of the DNA Probe Method to Microscopic Diagnosis,» Am J Trop Med Hyg, 1989, 41(3):266-72.

6. Howard, R. J. et al, 1986: Secretion of a Malarial histidinerich Protein (PfHRPII) from Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes. J. Cell Biol., 103, .

7. Parra, M. E., et al, 1991: Identification of Plasmodium falciparum histidine-Rich Protein 2 in the Plasma of Humans with Malaria. J. Clin. Micb., 29, .

Соблюдать температуру хранения Читать инструкцию Не использовать повторно Только для in vitro диагностики