Одной из важнейших характеристик штаммов вируса гриппа А является наличие маркера чувствительности к лечебным препаратам, особенно к Тамифлю (активное начало озельтамивир) который является наиболее эффективным при лечении гриппа и рекомендован ВОЗ к широкому применению. Озельтамивир является ингибитором нейраминидазы и известно, что аминокислотные замены в позициях 119, 274, 292 и 294 в нейраминидазе (нумерация в соответствии с NA субтипа 2), указывают на устойчивость штаммов вируса гриппа А к озельтамивиру. Все штаммы вируса гриппа H5N1, выделенные на территории юга Западной Сибири, имеют в этой позиции гистидин и являются потенциально чувствительными к озельтамивиру.

Таким образом, основным результатом мониторинга вируса гриппа у птиц на территории юга Западной Сибири явилось установление факта активной циркуляции этого патогена как у диких, так и домашних птиц. Важным результатом мониторинга считаем создание коллекции штаммов высокопатогенного вируса гриппа H5N1-субтипа, выделенных от диких и домашних птиц в России в  гг. и отсутствие выявленных случаев высокопатогенного гриппа H5N1-субтипа у синантропных видов птиц на юге Западной Сибири в гг. Филогенетический анализ выделенных высокопатогенных вирусов гриппа H5N1 показал, что все циркулировавшие на юге Западной Сибири в гг. варианты вируса гриппа H5N1-субтипа имеют свое происхождение от вариантов, вызвавших эпизоотии среди диких и домашних птиц в Юго-Восточной Азии и Китае, принадлежащих к двум различным генетическим линиям - кладам 2.2 и 2.3.2.

Рисунок 4 – Филогенетическое дерево вируса гриппа H5N1 построенное на основании сравнения нуклеотидных последовательностей гена, кодирующего гемагглютинин. Подчеркнуты штаммы выделенные нами на ЮЗС.

Рисунок 5 – Филогенетическое дерево вируса гриппа H5N1 построенное на основании сравнения нуклеотидных последовательностей гена, кодирующего нейраминидазу. Выделены штаммы изолированные нами на ЮЗС.

3. ВЫВОДЫ

1.  Научная и практическая актуальность различных вирусных патогенов обусловлена потенциалом их экологического полиморфизма, максимальные эволюционные последствия реализации которого могут выражаться в их широком эпизоотическом и/или эпидемическом распространении за пределами первичного природного очага. С учетом имеющихся литературных данных, а также результатов собственных исследований, вирусы бешенства, Западного Нила и гриппа птиц являются актуальными вирусными патогенами на территории юга Западной Сибири.

2.  Критерии, определяющие степень эпизоотологической, эпидемиологической и экономической значимости тех или иных патогенов для конкретного региона основаны на их способности в резервационном и/или эпизоотическом вариантах циркулировать в природных экосистемах у максимума хозяев, а в дальнейшем – распространиться на другие территории как внутри региона, так и за его пределами с реальными возможностями заболеваемости и гибели диких животных и птиц, заболеваемости и гибели сельскохозяйственных и домашних животных (птиц), а также человека.

3.  Лисицы, являющиеся на территории юга Западной Сибири основными резервуарами вируса бешенства, обеспечивают периодичность эпизоотий (3-5 лет) и служат основным источником его дальнейшего распространения за пределы природных эпизоотических очагов. Проведение пероральной антирабической иммунизации способствует купированию инфекции не только среди диких плотоядных, но и среди сельскохозяйственных животных, а также сокращает случаи обращения за антирабической помощью людей.

4.  Результаты изучения молекулярно-генетических характеристик лиссавирусов от 17 видов диких, сельскохозяйственных и домашних животных показали наличие трех основных филогенетических кластеров в пределах генотипа 1 вируса бешенства, циркулирующего на юге Западной Сибири, что свидетельствует о широком распространении этого патогена в данном регионе.

5.  Лесостепная и степная зоны юга Западной Сибири обладают обязательными признаками традиционных очагов циркуляции вируса Западного Нила (ВЗН): наличие высокой численности восприимчивых птиц, разнообразие эпизоотически и эпидемически значимых комаров-переносчиков, а также климатические условия, благоприятные для активности переносчиков.

6.  Возможная эпизоотическая вспышка ВЗН на ЮЗС подтверждается фактами обнаружения мертвых птиц, инфицированных этим патогеном. Маркеры ВЗН обнаружены у ряда мелких млекопитающих, причем в лесостепной зоне до 100% случаев, в степной – до 40%. Разницу показателей можно объяснить различной численностью комаров-переносчиков.

7.  Филогенетический анализ показал, что западносибирские варианты ВЗН являются генетически близкими между собой, имеют ряд уникальных мутаций, но близки с патогенными для людей штаммами ВЗН, изолированными на юге России, что вызывает опасение о возможности формирования природных очагов с уникальными эколого-вирусологическими характеристиками, и распространению этих вариантов вируса в популяции сельскохозяйственных и домашних животных и человека.

8.  На юге Западной Сибири сходятся миграционные потоки более 250 видов диких птиц, зимующих в различных регионах мира, в том числе неблагополучных по высокопатогенному гриппу птиц H5N1. В этой связи указанная территория в значительной степени способствует широкому географическому распространению вирусов гриппа А в популяциях диких птиц в Евразии.

9.  В течение трех лет до начала эпизоотии высокопатогенного гриппа птиц H5N1 в РФ (август 2002 – июнь 2005 г.) на юге Западной Сибири подтверждалась циркуляция вируса гриппа типа А у диких птиц. Средняя зараженность вирусами гриппа обследованного поголовья диких птиц составила 9,4%. Все исследованные изоляты имели филогенетическое родство с вирусами гриппа, выделенными в годах у диких птиц в Европе и Азии.

10. Эпизоотия гриппа птиц типа А (субтип Н5N1) на территории юга Западной Сибири началась в июле 2005 года и в течение последующих 30 дней проявилась прежде всего «переходом» возбудителя от естественных носителей (диких птиц) на домашнюю птицу с высоким уровнем ее заболеваемости и гибели. Вторую волну эпизоотических вспышек гриппа среди домашней птицы наблюдали в октябре. В общей структуре падежа домашней птицы от гриппа за весь период эпизоотии 2005 года на июль приходится 55,2%, на август – 32% и на октябрь – 12,4%.

11. В период эпизоотии 2005 года на территории юга Западной Сибири от диких и домашних птиц выделяли только изоляты вируса гриппа типа А субтипа Н5N1. Среди птиц синантропных видов на ЮЗС в годах случаев выделения высокопатогенного вируса гриппа H5N1 не выявлено, что указывает на их незначительную роль в распространении и циркуляции вируса гриппа данного субтипа во время этой эпизоотии.

12. Изоляты высокопатогенного вируса гриппа птиц субтипа Н5N1, выделенные в период эпизоотии 2005 года, во всех случаях имели филогенетическое родство с вирусом, выделенным в Северном Китае в мае 2005 года (клада 2.2.). В 2009 году произошел занос с дикими птицами нового генотипа высокопатогенного вируса гриппа H5N1 (клада 2.3.2.) на территорию ЮЗС. Наиболее вероятным районом, из которого был занесен этот вариант вируса, явилось, так же как и в 2005 году, озеро Цинхай (Северный Китай).

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Создана коллекция из 37 штаммов вируса гриппа типа А, в том числе из 16 высокопатогенного H5N1-субтипа, выделенных в России в гг., которые приняты на патентное депонирование в Коллекцию микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора и могут использоваться в дальнейших научных исследованиях в том числе для разработки диагностических препаратов и вакцин.

По результатам работы 386 нуклеотидные последовательности полных генов вируса бешенства, вируса Западного Нила и вируса гриппа типа А зарегистрированы в международной базе данных GenBank и могут в дальнейшем служить основой для конструирования праймеров и филогенетических исследований этих вирусов.

Обоснованные результатами комплексных исследований эволюционные принципы экологического полиморфизма и территориального распространения природно-очаговых вирусных патогенно необходимо использовать в процессе разработки и практической реализации оптимальных систем противоэпизоотических и противоэпидемических мероприятий при актуальных природно-очаговых зооантропонозных инфекционных болезнях, а также в дальнейших научных исследованиях.

Указанные принципы нашли отражение в 5 утвержденных на российском и региональном уровнях методических указаниях и рекомендациях.

5.  СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных

ВАК Минобразования и науки РФ

1.  Шестопалов, и его распространение в мире / , , // Вопросы вирусологии. – 2001. – Т. 46. - № 2. – С. 7-12.

2.  Шестопалов, фактора некроза опухоли α на эффективность вакцинации против бешенства / , , // Вопросы вирусологии. – 2002. – № 2. – С. 37-40.

3.  Терновой, вируса Западного Нила у птиц на территории Барабинской и Кулундинской низменностей (Западно-Сибирский пролетный путь) в летне-осенний период 2002 г. / , , , // Вопросы вирусологии. – 2004. – Т. 49(3). – С. 52-56.

4.  Зайковская, обстановка по бешенству в Новосибирской области в период 1997 – 2003 гг. / , , // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2005. – № 4. – С. 37-40.

5.  Зайковская, -генетическая характеристика изолятов вируса бешенства, выделенных на территории Западной Сибири / , , // Вестник Российской академии медицинских наук. – 2005. – № 2. – С. 30-35.

6.  Разумова, разнообразие вирусов гриппа А в популяциях диких птиц на юге Западной Сибири / , , // Вопросы вирусологии. – 2005. – №4. – С.31-35.

7.  Терновой, у летучих мышей, обитающих на юге Западной Сибири / , , B. Scharf, // Вопросы вирусологии. – 2005. – № 1. – С. 31-35.

8.  Донченко, в Западной Сибири высокопатогенных вирусов гриппа птиц типа А субтипа H5N1 / , , // Достижения науки и техники АПК– № 1. – С. 23-25.

9.  Зайковская, участия рукокрылых (Mammalia, Chiroptera), обитающих в Западной Сибири, в циркуляции возбудителей зоонозов, потенциально опасных для человека / , , // Вестник Красноярского государственного университета. – 2006. – № 5/1. – С. 98-104.

10. Кононова, вируса Западного Нила в популяциях диких птиц наземного и древесно-кустарникового комплексов на территории Барабинской лесостепи и Кулундинской степи ( гг.) / , , , // Вопросы вирусологии. – 2006. – Т. 51. – № 4. – С. 19-23.

11. Онищенко, высокопатогенного H5N1 вируса гриппа, выделенного от больных и погибших птиц в Западной Сибири / , , , // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2006. – № 5. – С. 47-54.

12. Разумова, мониторинга вируса гриппа А в популяциях диких птиц на юге Западной Сибири (данные 2003 г.) / , , // Вопросы вирусологии. – 2006. – № 3. – С. 32‑37.

13. Терновой, вируса Западного Нила, выявленного у птиц на юге Приморского края в течение гг. / , , // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 2006. – № 4. – С. 30-35.

14. Шестопалов, двухлетнего обследования диких птиц на территории Западной Монголии на присутствие вируса гриппа / , , Даважав Авмед., Т. Алтантсетсег, Д. Цэрэнноров, Д. Отгонбаатар, , // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2006. – № 5. – С

15. Юшков, вирусов гриппа типа А у домашней птицы в предэпизоотический период 2005 г. в Новосибирской области / , , // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2006. – № 5. – С. 59-65.

16. Евсеенко, разнообразия высоко патогенных вирусов гриппа H5N1, вызвавших эпизоотии среди птиц на территории Западной Сибири в 2005 году / , , R. G. Webster, , // Доклады Академии наук. – 2007. – Т. – С. 561-565.

17. Ильичева, свиней в неблагополучных пунктах по гриппу птиц H5N1 / , , // Ветеринария. – 2007. – № 5. – C. 23-25.

18. Ковалевская, вируса гриппа среди дикой и синантропной птицы на территории Омской области (данные за 2006 г.) / , , // Ветеринарная патология. – 2007. – № 1. –С. 178-181.

19. Кононова, состав кровососущих комаров (Diptera, Culicidae) и возможность формирования очагов циркуляции вируса Западного Нила на юге Западной Сибири / , , // Паразитология. – 2007. – Т. 41. –№ 6. – С. 459-470.

20. Евсеенко, инфекционного заболевания мышей, вызванного вирусом гриппа птиц H5N1-подтипа / , , // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2008. – Приложение «Труды научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН». – С. 52-55.

21. Потапова, изменения в лимфоидных органах мышей, инфицированных вирусом гриппа птиц H5N1-субтипа А/goose/Krasnoozerskoye/627/05 / , , // Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. – 2008. – № 5. – С. 162-165.

22. Прокудин, мониторинг гриппа А у диких птиц на Таймыре в  гг. / , , // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. – 2008. – № 6. – С. 92-94.

23. Шаркова, изменения в печени мышей, инфицированных вирусом гриппа птиц субтипа H5N1 // , , // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2008. – Т. – С. 210-212.

24. Шаршов, биологические характеристики вновь выделенного высокопатогенного вируса гриппа H5N1 / , , // Российский иммунологический журнал. – 2008. –Т– № 2-3. – С. 265.

25. Шестопалов, A. M. Изучение патогенности штаммов вируса гриппа птиц H5N1-субтипа, выделенных на территории Российской Федерации, на мышиной модели / A. M. Шестопалов, , // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2008. – Т.146. – № 9. – С. 317-319.

26. Шестопалова, изменения внутренних органов птиц при экспериментальном заражении высокопатогенным вирусом гриппа птиц H5N1-подтипа / , , // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2008. – Приложение № 1 «Труды научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН». – С. 56-59.

27. Яцышина, и молекулярная характеристика вирусов гриппа A/H5N1, выделенных во время вспышек гриппа у птиц в 2005 г. в европейской части России: выделение штамма вируса с мутацией устойчивости к озельтамивиру / , , , // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 2008. – № 1. – С. 26-34.

28. Донченко, биологических свойств вируса гриппа птиц H5N1-субтипа, выделенного в России / , , // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. – 2009. – № 10. – С. 84-89.

29. Донченко, вакцины против высокопатогенного вируса гриппа птиц Н5N1 / , , // Ветеринария. – 2009. – № 2. – С.23-26.

30. Зайковская, вирусом бешенства лисиц без клинических признаков болезни на стационарно неблагополучных территориях / , , // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. – 2009. – № 2. – С. 117-119.

31. Курская, торможения гемагглютинации для ретроспективной диагностики гриппа птиц у млекопитающих / , , // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2009 – № 5. – С. 75-79.

32. Курская, антител к вирусу гриппа А у населения различных регионов Западной Сибири / , , // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2009. – № 3. – С. 92-95.

33. Романовская, чувствительности вирусов гриппа A(H1N1), вызвавших заболевания в апреле-мае 2009 года, к противовирусным препаратам в культуре клеток MDCK / , , ёва, // Антибиотики и химиотерапия. – 2009. – Т. 54(5-6). – С. 41-47.

34. Ковалевская, инфекция вируса гриппа А/H5N1 у представителей вида felis catus / , , // Ветеринария. – 2010. – № 3. – С. 28-30.

35. Шаршов, высокопатогенного штамма вируса гриппа Н5N1-субтипа, выделенного от сизой чайки (Larus canus) / К. А Шаршов, , // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2010. – № 1. – С. 29-32.

Патенты

36. Патент 2340673 Российская Федерация, МПК С 12N 15/00. Набор олигонуклеотидных праймеров для идентификации РНК вируса бешенства в образцах / , , Шестопалов А. М.; заявитель и патентообладатель ФГУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора. – № , заявл. 10.04.07; опуб. 10.12.08, Бюл. № 34. – С. 54.

37. Патент 2366709 Российская Федерация, МПК С 12 N 7/00. Штамм вируса гриппа птиц А/ Goose / Krasnozerskoye/ 627/ 05 H5N1 субтипа для изучения биологии вируса гриппа, лечебной и профилактической эффективности противовирусных препаратов / , , ; заявитель и патентообладатель ФГУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора. – № /13, заявл. 13.05.08, опубл. 10.09.09, Бюл. № 25 – С.57.

Книги

38. Дроздов диагностика опасных инфекционных болезней: практическое руководство / , , , , .- Москва, Изд-во «Медицина, изд-во «Шико», 2009. – 472 с.

39. Грипп птиц в Сибири: Лабораторные и эпидемиологические исследования, противоэпидемические и противоэпизоотические мероприятия в период эпизоотии вируса гриппа среди домашней птицы в Сибирском и Уральском федеральных округах Российской федерации (июль – ноябрь 2005 года)/ Под общ. ред. акад. . / , , , // Новосибирск: ЦЭРИС– 192 с.

Статьи в научных журналах

40. Шестопалов, по рабической инфекции в Новосибирской области / , , // Микробиология. – 1999. – № 3. – С. 115-116.

41. Кононова, вируса Западного Нила у врановых юга Западной Сибири / , , // Журнал инфекционной патологии. – 2004. – Т.– С.73-76.

42. Разумова, циркуляции вирусов гриппа А в популяциях диких птиц на юге Западной Сибири / , , // Журнал инфекционной патологии. – 2004. – Т.– С.91-94.

43. Онищенко, в Западной Сибири высокопатогенных H5N1 вирусов гриппа, генетически родственных вирусам, циркулирующим в Юго-Восточной Азии в гг. / , , , // Доклады Академии наук. – 2006. – № 2. – С. 278-280.

44. О первых результатах эпидемиологического мониторинга лихорадки Западного Нила в Новосибирской области / , , // Сибирь-Восток– № 3. – С. 45-48.

45. Ковалевская, вируса гриппа среди дикой и синантропной птицы на территории Омской области в 2006 г. / , , // Ветеринарный консультант. – 2007. – № 5 (144). – C. 7‑10

46. Онищенко, -биологический анализ изолятов вируса гриппа птиц, вызвавших эпизоотии на юге западной Сибири и в Крыму / , , // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2007. – № 5. – С. 28-32.

47. Разумова -генетический анализ гена гемагглютинина штамма вируса гриппа А подтипа Н5, изолированного на юге Западной Сибири в 2003 году / , , // Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. – 2007. – № 5 (127). – С.78-82.

48. Терновой лихорадки Западного Нила в Новосибирской области в 2004 г. и генотипирование вируса, вызвавшего заболевание / , , // Вестник Российской академии медицинских наук. – 2007. – № 1. – С. 21-26.

49. Хатько и мониторинг гриппа птиц на территории Омской области / , , // Молекулярная диагностика. – 2007. – Т. 1. – С. 217-219.

50. Шаршов мониторинга вируса гриппа среди синантропных птиц в эпизоотический и постэпизоотический периоды на юге Западной Сибири / , , // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2007. – № 4. – С. 53-56.

51. Чернявский, грипп в Якутии: проблема, опыт, диагностика и профилактика / , , // Якутский медицинский журнал. – 2008. – № 1. – С. 39-41.

52. Шестопалова, изменения легких у мышей, инфицированных вирусом гриппа птиц H5N1 субтипа / , , // Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. – 2008. – Т. 6. – № 3-2. – С. 3-10.

53. Ковалевская, патогенности вирусов гриппа А/H5N1 для домашних кошек / , , // Сборник Института Природно-очаговых инфекций. – 2009. –С. 230-231.

54. Онищенко, штаммов пандемического вируса гриппа, выделенных на территории России / , , , , // Проблемы особо опасных инфекций. – 2009. – № 000.– С.5-9.

55. Силко, онколитической активности штаммов вируса болезни Ньюкасла / , , // Казанская наука. – 2009. – Вып. 1. – С. 13.

56.  Силко, выделения вируса болезни Ньюкасла на территории России / , , // Вестник Новосибирского государственного университета. Серия: Биология, клиническая медицина. – 2010. – Т. 8. – № 1. – С. 57-61.

Статьи в иностранных научных журналах

57. Evseenko, V. A. Investigation of HPAI viruses caused epizooty in Russia in 2005 / V. A. Evseenko, A. V. Zaikovskaya, A. S. Lipatov, A. M. Shestopalov // International Journal of Infectious Diseases (IJID) supplemental edition. –2006. – June. – Р. 127.

58. Shestopalov, A. M. H5N1 Influenza Virus, Domestic Birds, Western Siberia, Russia / A. M. Shestopalov, A. G. Durimanov, V. A. Evseenko, V. A. Ternovoi, Y. N. Rassadkin, Y. V. Razumova, A. V. Zaykovskaya, S. I. Zolotykh, S. esov // Emerging Infectious Diseases. – 2006. – V. 12(7). – Р. .

59. Marchenko, V. Yu. Results of the influenza virus surveillance in wild birds in Western part of Mongolia / V. Yu. Marchenko, A. Yu. Alekseev, D. Tserennorov, A. K. Yurlov, I. M. Susloparov, K. A. Sharshov, F. A. Ilyinykh, S. I. Zolotykh, D. Abmed, D. Otgonbaatar, A. M. Shestopalov // Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. – 2010. – V.1. – P. 6-10.

60. Evseenko, V. A. Experimental infection of H5N1 HPAI in BALB/c mice / V. A. Evseenko, E. K. Bukin, A. V. Zaykovskaya, K. A. Sharshov, V. A. Ternovoi, G. M. Ignatyev, A. M. Shestopalov // Virology Journal. – 2007. –V. 27(4). – P. 77.

61. Lipatov, A. S. Influenza (H5N1) viruses in poultry, Russian Federation, / A. S. Lipatov, V. A. Evseenko, H. L. Yen, A. V. Zaykovskaya, A. G. Durymanov, S. I. Zolotykh, S. esov, I. G. Drozdov, G. G. Onishchenko, R. G. Webster, A. M. Shestopalov // Emerging Infectious Diseases. – 2007. – V. 13(4). – P. 539-546.

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3