Como os revestimentos finos de metais de transição e nobres promovem a biocompatibilidade e propriedades antimicrobianas em aplicações biomédicas?

O efeito sinérgico do cobre (Cu) em revestimentos finos para aplicações biomédicas revela um mecanismo dual fascinante: a liberação rápida de íons Cu inibe o crescimento microbiano, enquanto simultaneamente estimula a regeneração do tecido ao ativar o sistema imunológico. A deposição por sputtering de uma camada ultrafina de Cu (50 nm) sobre nanofibras de poli(ε-caprolactona) (PCL) exemplifica o desafio técnico e o potencial biológico desse método. As nanofibras de PCL, sensíveis à temperatura, exigem um processo cuidadoso para garantir a adesão do filme metálico sem danificar a matriz polimérica, mantendo um conteúdo de Cu suficientemente alto para exercer efeito antimicrobiano eficaz. A alta razão superfície/volume proporcionada por essas camadas finas acelera a liberação dos íons Cu²⁺, que demonstraram ação bactericida robusta contra Escherichia coli e Staphylococcus aureus, preservando a biocompatibilidade necessária para a integração tecidual.

Em concentrações estequiométricas otimizadas, compostos contendo Cu mostram-se promissores não só pelo combate a agentes patogênicos, mas também pela promoção da proliferação celular saudável. Estudo de filmes finos nanocristalinos Ti-Cu reforça essa perspectiva ao evidenciar que células fibroblásticas de camundongo mantêm morfologia adequada e alta viabilidade (acima de 90%) após exposição a íons de Cu. Este elemento atua como cofator essencial em diversas enzimas e é fundamental na síntese proteica, desempenhando papel crucial no funcionamento mitocondrial e no crescimento celular. A combinação das propriedades mecânicas do titânio (Ti) com as qualidades antimicrobianas do Cu pode revolucionar o desenvolvimento de biomateriais, abrindo caminhos para revestimentos de alta resistência, biocompatíveis e funcionais.

Paralelamente, o platina (Pt) destaca-se na fabricação de sensores e dispositivos biomédicos, graças à sua inércia química e alta condutividade. A miniaturização de sensores de pH por meio da técnica de ressonância de plasmon de superfície em fibras ópticas revestidas por camadas de Pt e polianilina (PANI) representa um avanço notável, aprimorando a precisão na detecção de variações químicas em ambientes biológicos. Além disso, o uso de filmes finos de Pt em motores micro e nano Janus demonstra potencial para aplicações biomédicas como a entrega direcionada de medicamentos e o diagnóstico do câncer. Revestimentos de Pt conferem aos motores uma velocidade média muito superior em comparação a seus equivalentes não metálicos, possibilitando a alternância entre diferentes mecanismos de propulsão e, consequentemente, adaptabilidade a variados cenários biomédicos.

Dispositivos médicos implantáveis, como arrays de microeletrodos flexíveis (fMEAs), beneficiam-se de revestimentos Ti/Pt depositados por sputtering, que garantem alta viabilidade celular e robustez mecânica, essenciais para aplicações clínicas complexas, incluindo interfaces cérebro-máquina e neuropróteses. O delicado equilíbrio entre adesão, flexibilidade e biocompatibilidade nesses filmes finos demonstra a sofisticação alcançada pelos processos modernos de deposição.

Apesar do longo histórico do sputtering físico por deposição a vapor (PVD), sua capacidade de produzir revestimentos metálicos, cerâmicos e compostos com pureza, uniformidade e controle preciso de composição e espessura continua a torná-lo indispensável no desenvolvimento de soluções biomédicas. O titânio permanece o metal de escolha devido à sua biocompatibilidade e compatibilidade com ligas padrão da indústria, enquanto a incorporação de metais nobres suaves (ouro, prata, cobre) amplia as funcionalidades antimicrobianas e mecânicas dos revestimentos. Pesquisas emergentes envolvendo sistemas de ligas de alta entropia (HEA) baseadas em Ti indicam um caminho promissor para aprimorar ainda mais resistência, resistência à corrosão e biocompatibilidade.

Além disso, outros metais de transição, como o tântalo, zinco, zircônio, nióbio e ferro, contribuem com propriedades específicas como resistência à corrosão, sensoriamento, dureza, ductilidade e magnetismo, ampliando o leque de possibilidades para o desenvolvimento de biomateriais multifuncionais. Metais nobres, por sua vez, são frequentemente empregados em aplicações de alta precisão, como eletrodos de biossensores, enquanto prata e cobre atendem demandas mais econômicas para efeitos antimicrobianos. A exploração contínua dessas combinações e técnicas promete avanços na fabricação de curativos antimicrobianos, dispositivos diagnósticos e motores micro/nano para entrega seletiva de fármacos.

Compreender a relação entre a composição química, as propriedades físicas dos filmes finos e suas interações biológicas é fundamental para o avanço de biomateriais. A otimização das concentrações iônicas, o controle da espessura das camadas e a escolha adequada do metal de base e dopantes são essenciais para alcançar o equilíbrio entre eficiência antimicrobiana, biocompatibilidade e durabilidade mecânica. Além disso, a integração de técnicas avançadas de deposição, como sputtering DC, RF, pulsado DC e HIPIMS, permite ajustes finos que garantem a qualidade e repetibilidade necessárias para aplicações clínicas rigorosas. A complexidade dos sistemas biológicos requer uma abordagem interdisciplinar, envolvendo química, física dos materiais, biologia celular e engenharia para que esses revestimentos possam efetivamente contribuir para tratamentos médicos inovadores e seguros.

Como Antioxidantes, Emolientes e Modificadores Reológicos Potenciam a Proteção Solar

Os filtros solares modernos não se limitam apenas aos ingredientes tradicionais, como óxido de zinco e dióxido de titânio. Nos últimos anos, diversas inovações, como antioxidantes, emolientes e modificadores reológicos, têm sido incorporadas a essas fórmulas, proporcionando uma proteção mais eficaz e multifacetada contra os danos causados pela radiação UV.

Um dos componentes interessantes no campo da proteção solar são os antioxidantes, que têm se mostrado fundamentais na proteção da pele contra os radicais livres gerados pela radiação ultravioleta (UV). A radiação UV-A, em particular, é conhecida por induzir o estresse oxidativo, acelerando o envelhecimento da pele. Nesse contexto, os antioxidantes desempenham um papel crucial na neutralização desses radicais livres e na prevenção de danos no DNA da pele. Quando os radicais livres causam danos significativos ao material genético, proteínas como a p53 são expressas. A presença dessa proteína é um biomarcador de danos celulares, que pode resultar em morte celular programada se o dano for irreversível.

Dentre os antioxidantes mais eficazes, o dihidroxifenil benzimidazol carboxílico (Oxisol) se destaca. Embora Oxisol não possua capacidade de filtrar radiação UV por si só, ele tem um efeito de aumento do Fator de Proteção Solar (FPS) quando combinado com filtros UV-A e UV-B. Sua principal ação é como um scavenger de radicais livres, sendo eficaz tanto na proteção contra danos celulares quanto na melhoria do desempenho dos filtros solares, como o óxido de zinco (ZnO) e o dióxido de titânio (TiO2). Estudos indicam que Oxisol também pode aumentar a absorção da luz visível pelos filtros solares, o que contribui para um FPS mais alto, potencializando a eficácia da proteção solar.

Outro ingrediente interessante é o extrato da folha de Cassia alata, que, combinado com o Oxynex-ST, um antioxidante e fotoinstabilizador, oferece uma proteção significativa contra os danos da radiação UV. Embora o extrato de Cassia alata isoladamente não aumente o FPS, ele se mostrou altamente eficaz quando associado a filtros solares orgânicos, como o avobenzona, alcançando um FPS de até 60. Este complexo antioxidante foi capaz de reduzir a expressão de p53, protegendo a pele de danos mais profundos e promovendo uma melhor estabilidade dos filtros solares.

Além disso, o uso de extratos de bambu nativo brasileiro também tem sido estudado. Cinco espécies de bambu, como Aulonemia aristulata e Chusquea bambusoides, possuem propriedades antioxidantes que aumentam o FPS quando combinadas com filtros solares orgânicos. Esses extratos não só contribuem para o aumento do FPS, mas também auxiliam na estabilidade dos filtros solares, prolongando sua eficácia.

O rutina, um flavonoide encontrado em diversas plantas como maçãs e chá verde, também é um excelente antioxidante e fotoinstabilizador. Em formulações com filtros solares orgânicos, o rutina demonstrou aumentar o FPS em até 70%, além de reduzir a formação de eritema na pele, o que indica uma melhora na proteção contra os danos causados pela radiação UV. Sua estrutura química, com grupos hidroxila nas posições certas, facilita a varredura dos radicais livres, tornando-o um agente eficaz na proteção da pele.

A ubiquinona, também conhecida como coenzima Q, é outro antioxidante notável que atua como estabilizador de filtros solares orgânicos. A pesquisa mostrou que a ubiquinona não só melhora a eficácia dos filtros solares, mas também protege a pele contra os danos da radiação UV, estabilizando as moléculas de proteção solar.

Além dos antioxidantes, outro aspecto essencial para a eficácia dos protetores solares é a formulação de sua textura e a maneira como o produto se espalha sobre a pele. O uso de modificadores reológicos, como a metilcelulose, tem se mostrado uma abordagem eficaz para melhorar a viscosidade e a espalhabilidade dos filtros solares. A metilcelulose é um derivado da celulose que, quando incorporado a filtros solares inorgânicos, como o óxido de zinco, ajuda a formar um filme uniforme e espesso na pele, aumentando a proteção. Além disso, a metilcelulose é compatível com diversos tipos de ingredientes, o que facilita sua integração em diversas formulações cosméticas.

A combinação desses ingredientes inovadores oferece um avanço significativo na proteção solar, não apenas em termos de bloqueio da radiação UV, mas também ao melhorar a estabilidade dos filtros solares, aumentar a resistência dos produtos a fatores externos e proteger a pele contra danos celulares a longo prazo. É importante lembrar que, além de fornecer uma proteção eficaz contra os raios solares, esses ingredientes também contribuem para o cuidado e saúde da pele, minimizando os danos que podem levar ao envelhecimento precoce e até ao desenvolvimento de câncer de pele.

Como a microscopia de força atômica revoluciona a observação e análise de células microbianas vivas

A microscopia de força atômica (AFM) estabeleceu-se como uma ferramenta fundamental para a visualização e análise das estruturas supramoleculares de sistemas microbianos em condições próximas às naturais, seja em meio líquido ou no ar. Diferentemente da microscopia eletrônica, a AFM permite observar células vivas em tempo real, oferecendo detalhes nanométricos que antes eram inacessíveis. Essa capacidade é crucial para compreender a dinâmica e a morfologia das células, desde a superfície celular até estruturas externas como flagelos e pili.

O processo de fixação de moléculas individuais às pontas do AFM é realizado com o uso de cruzadores químicos, como o polietilenoglicol, que previnem a desnaturação e garantem uma mobilidade controlada da amostra durante a análise. A funcionalização dessas pontas com grupos amino e aldeídos, além do uso de monolâminas auto-montadas de alcanotiols em ouro, proporciona um ancoradouro estável para a ligação direta com proteínas, especialmente por meio de resíduos de lisina. Essas técnicas asseguram a integridade e a especificidade das interações estudadas, permitindo observações detalhadas da morfologia e propriedades mecânicas das células.

No ar, a AFM minimiza a área de contato entre a célula e o substrato, evitando a deformação causada pela adesão, o que é especialmente relevante para bactérias vivas, cuja superfície está em estado turgente. Essa abordagem simplifica o monitoramento da morfologia bacteriana e a análise quantitativa de estruturas como flagelos, possibilitando distinguir níveis variados de flagelação em cepas mutantes, por exemplo, de Bacillus thuringiensis.

A possibilidade de realizar imagens em meio líquido abriu uma nova era para o estudo dinâmico de células vivas. A observação em tempo real da germinação de esporos de Bacillus atrophaeus, por exemplo, revelou alterações na estrutura e topografia do revestimento do esporo induzidas pela germinação. Essa capacidade dinâmica supera limitações tradicionais da microscopia eletrônica e óptica, ao permitir o acompanhamento de processos celulares naturais sem fixação.

Além disso, o AFM tem sido empregado para estudar a orientação e interação de estruturas externas das células, como flagelos, durante os estágios iniciais da formação de biofilmes. Em superfícies nobres organizadas, como ouro com micro e nanotrenches, observou-se que a orientação dos flagelos desempenha papel crucial na comunicação e contato entre células vizinhas, facilitando a acumulação e a consolidação do biofilme.

A análise topográfica em tampões revelou diferenças morfológicas significativas em cepas mutantes de Lactococcus plantarum, destacando o papel dos ácidos wall-teicóicos (WTAs) na polarização da superfície celular e na morfogênese, que inclui forma, rugosidade, divisão e elongação celular. Essas observações sublinham a importância dos componentes da parede celular na manutenção da integridade e funcionalidade microbiana.

Outra aplicação notável do AFM é a utilização de pontas funcionalizadas quimicamente para diferenciar interações hidrofílicas e hidrofóbicas na superfície celular. Por exemplo, as análises em Acinetobacter venetianus demonstraram que os pili finos são estruturas hidrofóbicas que interagem de modo distinto conforme a natureza da ponta do AFM, influenciando diretamente a capacidade de detecção e análise morfológica dessas estruturas extracelulares.

O AFM também tem sido empregado para estudar a divisão celular em condições fisiológicas, como mostrado em imagens de Staphylococcus aureus em meio nutritivo, e para avaliar os efeitos de agentes antimicrobianos, incluindo nanopartículas metálicas conjugadas com antibióticos. Essas nanopartículas potencializam a ação antimicrobiana, acelerando a destruição da morfologia celular, como observado em Escherichia coli tratada com conjugados de ceftriaxona e nanopartículas de prata ou ouro.

A espectroscopia de força, uma vertente do AFM, permite medir diretamente as forças de interação específicas, como as ligações receptor-ligante em células vivas. Estudos pioneiros empregaram pontas de AFM revestidas com lectinas para mapear a localização de polissacarídeos na superfície de leveduras, revelando detalhes essenciais sobre a adesão e reconhecimento molecular que regulam a interação microbiana.

A compreensão da importância estrutural e funcional das superfícies celulares microbianas, proporcionada pela AFM, vai muito além da simples observação morfológica. Ela oferece uma janela para a dinâmica das interações moleculares e das propriedades mecânicas que governam processos vitais, como adesão, motilidade, comunicação celular e resposta a agentes externos. A integração dessas informações é essencial para o desenvolvimento de estratégias inovadoras em microbiologia, biotecnologia e medicina, especialmente na era dos antibióticos avançados e da nanotecnologia aplicada.

É imprescindível compreender que o AFM não só revela imagens, mas também decifra as forças e interações na interface célula-substrato e célula-molécula, permitindo um entendimento profundo da fisiologia microbiana e das suas adaptações. Além disso, a análise sob diferentes condições ambientais, como variações de umidade e presença de tampões, demonstra como o ambiente influencia a estrutura e a funcionalidade celular, aspecto vital para a manipulação e controle de microrganismos em diversas aplicações.

Como a Fotolitografia Define os Detalhes na Produção de Circuitos Integrados

Na fotolitografia, a escolha do tipo de fotoresiste (positiva ou negativa) desempenha um papel crucial na definição do padrão final no substrato. Cada tipo de fotoresiste responde à exposição à luz de maneira diferente, o que resulta em padrões opostos entre os dois. No caso do fotoresiste negativo, as áreas expostas à luz tornam-se polimerizadas e resistem ao desenvolvimento químico, o que significa que as regiões iluminadas não são removidas durante o processo de revelação. Já no fotoresiste positivo, a exposição à luz torna a substância solúvel, de modo que as áreas iluminadas são removidas, criando um padrão que corresponde exatamente à máscara utilizada.

Em termos de características, os fotoresistes positivos geralmente oferecem maior nitidez de imagem e melhor resolução, enquanto os fotoresistes negativos, embora com resolução mais baixa, apresentam vantagens como menor custo e maior resistência a processos de plasma e ao ataque químico. A escolha entre positivo e negativo depende das necessidades específicas da aplicação, como resolução, custo, resistência ao ataque e facilidade de uso.

Na prática, o processo fotolitográfico envolve várias etapas críticas que garantem a precisão e qualidade dos padrões formados. O primeiro passo é a preparação da superfície do substrato, que geralmente inclui um processo de aquecimento a altas temperaturas para remover a umidade absorvida, melhorando assim a adesão do fotoresiste. Esse procedimento é seguido pela aplicação do fotoresiste, onde uma camada fina do material é espalhada uniformemente sobre a superfície do substrato utilizando uma centrífuga. A espessura dessa camada depende de fatores como concentração do fotoresiste, viscosidade e a velocidade de rotação, parâmetros que podem ser ajustados para controlar a espessura desejada.

Após a aplicação do fotoresiste, o substrato passa por um processo de "soft-bake", no qual o solvente presente no fotoresiste é parcialmente evaporado. Esse passo é essencial para melhorar a adesão, resistência ao ataque químico e as propriedades ópticas do material. A camada de fotoresiste precisa estar estabilizada para que o processo subsequente de exposição à luz seja bem-sucedido.

A exposição à luz ultravioleta é a etapa onde o padrão da máscara é transferido para o substrato. A máscara utilizada na fotolitografia geralmente consiste em uma camada metálica fina (como cromo ou alumínio) sobre um substrato de quartzo ou vidro. O alinhamento da máscara com o substrato é feito com precisão utilizando equipamentos como o "mask aligner", que garante que os padrões da máscara coincidam exatamente com a posição desejada no wafer. Existem três métodos principais de exposição: contato, proximidade e impressão por projeção. O método de contato oferece a melhor resolução, mas pode danificar a máscara devido ao contato direto com o wafer. Já o método de proximidade mantém uma distância entre a máscara e o substrato, o que reduz o risco de danos à máscara, mas também limita a resolução devido à difração da luz. O método de projeção é o mais utilizado na indústria, pois não há contato entre a máscara e o substrato, e a resolução pode ser muito alta, chegando a valores entre 0,1 e 1 μm.

A resolução na fotolitografia, particularmente nos métodos de contato e proximidade, é limitada pela difração da luz, que ocorre quando a luz passa pelas aberturas da máscara. Para superar essa limitação e obter uma resolução maior, sistemas de exposição de alta precisão utilizam fontes de luz com comprimentos de onda mais curtos, como o laser excimer de ArF (193 nm), ou lentes com alta abertura numérica.

Depois da exposição, a etapa de revelação envolve a dissolução das áreas de fotoresiste solúveis, o que pode ser feito manualmente ou, mais comumente, através de um método de rotação da wafer com a aplicação do desenvolvedor. Essa etapa é crucial, pois a interação entre o fotoresiste e o desenvolvedor determina a qualidade do perfil do fotoresiste e o controle da largura das linhas no padrão final.

Por fim, a etapa de "hard-bake" solidifica o padrão do fotoresiste para que ele resista aos processos subsequentes, como o ataque químico e a gravação. Essa etapa final garante que o padrão formado seja durável e capaz de resistir às condições extremas das etapas de fabricação subsequentes, como a gravação a plasma.

A fotolitografia, portanto, não é apenas uma técnica de transferência de padrões, mas um processo delicado que exige controle rigoroso em cada etapa, desde a escolha do tipo de fotoresiste até a exposição e desenvolvimento. As tecnologias e métodos utilizados para superar os desafios da resolução e da durabilidade são fundamentais para o sucesso da fabricação de circuitos integrados e componentes semicondutores.

É importante ressaltar que a fotolitografia continua a evoluir, com novas técnicas e materiais sendo desenvolvidos para permitir a produção de circuitos cada vez menores e mais complexos. A precisão e eficiência do processo fotolitográfico são essenciais para atender à demanda crescente por dispositivos eletrônicos mais potentes e compactos.

Por que blocos fundidos de WFA apresentam composição e estrutura tão heterogêneas?

A fundição de blocos de alumina fundida branca (WFA – White Fused Alumina) não é um processo homogêneo. Cada bloco fundido é, de fato, uma colagem de zonas com propriedades mineralógicas e estruturais profundamente distintas, resultado direto de dinâmicas térmicas e químicas que ocorrem durante o resfriamento da massa fundida. Essas diferenças impactam severamente a qualidade do abrasivo produzido e exigem uma compreensão meticulosa dos mecanismos de cristalização e segregação de fases que ocorrem no forno.

A morfologia do bloco fundido se divide em partes bem definidas: topo (ou “cap”), sub-topo, centro, laterais e base. Cada uma dessas zonas apresenta composição mineralógica, grau de pureza e estrutura física diferentes. O topo do bloco, por exemplo, caracteriza-se por uma estrutura porosa, esponjosa, com cristais esqueléticos de α-Al2O3 entrelaçados por lamelas finas de vidro. Essa região contém apenas cerca de 87% de α-Al2O3 em média, enquanto as regiões inferiores, como o centro denso e a base, atingem teores de até 100% de α-Al2O3 com ausência quase total de impurezas.

A presença de Na2O, ainda que em pequenas quantidades, resulta na formação de Na β-Al2O3 (Na2O·11Al2O3), uma fase deletéria que reduz a dureza e abrasividade do produto final. Essa fase tende a se concentrar nas regiões superiores do bloco, particularmente no centro superior, onde pode compor até 100% da fase sólida. Ensaios mostraram que partículas contendo 30% de Na β-Al2O3 têm abrasividade 16% menor em comparação com partículas puras. Tentativas de classificação granulométrica para eliminar essas regiões ricas em Na β-Al2O3 não foram suficientes: mesmo após essa triagem, o teor residual ainda permanecia em torno de 7–8%.

Para mitigar esse efeito, iniciou-se em 1949 a adição de sílica (SiO2) à carga de alumina. O objetivo era promover a formação de aluminossilicatos de sódio, como o carnegieíta (NaAlSiO4), em vez da indesejável Na β-Al2O3. Essa modificação química foi eficaz, pois cada molécula de Na2O passa a reagir com apenas uma molécula de Al2O3 (ao invés de onze), restringindo a formação de impurezas volumosas e diminuindo a contaminação do α-Al2O3.

Nos blocos fundidos com adição de areia de quartzo, observa-se a predominância de α-Al2O3 (~99%) em grãos angulosos e isométricos, com a presença de vidro intersticial e esferas metálicas isoladas. Nas seções laterais do bloco, os grãos de α-Al2O3 contêm cavidades gasosas aprisionadas durante a cristalização. Já o centro e a base, mais densos, apresentam inclusões vítreas capturadas no momento da solidificação.

A cinética de resfriamento desempenha papel crítico na formação dessas zonas distintas. À medida que a fusão esfria lentamente, o α-Al2O3 cristaliza primeiro, empurrando o restante do fundido, enriquecido em sódio e sílica, para as regiões centrais e superiores. Essas regiões, ao resfriarem subitamente com o desligamento do forno, não permitem a homogeneização da composição. Como consequência, formam-se cristais esqueléticos ocos, entre cujas faces se retém vidro e fases fundidas ricas em álcalis. A ausência de equilíbrio térmico e químico durante esse processo é evidente pela ampla variação dos índices de refração observados nas bandas de vidro e soluções sólidas formadas.

Os estudos teóricos do sistema ternário Na2O-Al2O3-SiO2 corroboram as práticas empíricas desenvolvidas ao longo das décadas. O diagrama de temperatura e concentração mostra que a área atribuída ao α-Al2O3 em diagramas clássicos, como o de Scherer e Bowen, na verdade corresponde à zona de cristalização primária da fase Na β-Al2O3. A linha de separação entre as regiões de composição de Na β-Al2O3 e da mullita (2Al2O3·SiO2) não representa uma curva de reação, mas sim um limite entre domínios de estabilidade térmica.

A cristalização da alumina sob condições não ideais revela não apenas a fragilidade do controle de fases, mas também a complexidade inerente ao projeto de cargas e ao manejo térmico. A segregação de impurezas e a formação de estruturas indesejadas nas regiões superiores dos blocos são inevitáveis se o processo não for ajustado com precisão. Assim, o entendimento profundo das interações entre os componentes da carga, o controle do tempo de resfriamento e a formulação correta da razão SiO2:Na2O (idealmente 2:1) são fatores determinantes para a obtenção de um WFA de alta qualidade.

É fundamental que o leitor compreenda que, embora a qualidade do α-Al2O3 seja determinada pela pureza da carga inicial, é o regime térmico e a engenharia de solidificação que definem, em última instância, a morfologia cristalina e a distribuição das fases secundárias. Um bloco com 99% de α-Al2O3 pode ainda conter fases deletérias mal distribuídas, comprometendo sua aplicação abrasiva. A pureza nominal deve ser lida com ceticismo técnico, pois a localização e forma das inclusões têm impacto superior ao mero percentual. A otimização da WFA, portanto, exige domínio simultâneo da termodinâmica, cinética de cristalização e engenharia do forno.